Ribosomal Protein L26 Antibody [L15C18] Datasheet

生物描述

特异性	Ribosomal Protein L26 Antibody [L15C18] 可检测内源性 Ribosomal Protein L26 总蛋白水平。
背景	核糖体蛋白L26 (RPL26) 是真核生物核糖体中60S大亚基的保守组成部分，该亚基由大约80种不同的蛋白质组成。RPL26位于25S/5.8S rRNA结构域I中新生多肽出口通道附近，其结构与细菌L24蛋白相似。RPL26具有紧凑的折叠结构，其序列重复和rRNA结合基序对于稳定核仁中早期pre-60S组装中间体至关重要。尽管RPL26缺失只会导致rRNA构象发生轻微变化，而不会破坏相邻核糖体蛋白（如L39）的稳定性。 RPL26在p53 mRNA特异性翻译中也发挥着关键作用：在DNA损伤（例如紫外线或化疗药物引起的损伤）后，RPL26以高亲和力结合p53 mRNA的5'非翻译区，促进核糖体募集，使p53蛋白合成数倍增加，并通过诱导p21促进细胞周期阻滞和凋亡。RPL26的过表达可通过选择性地提高p53水平来模拟MDM2抑制的效果。RPL26有助于27S前体rRNA的最佳成熟和前体60S亚基的有效输出，即使在半聚体多聚核糖体存在的情况下也能确保野生型翻译的准确性，并作为一种传感器将核仁完整性与p53介导的肿瘤抑制联系起来。 RPL26 失调与类似 Diamond-Blackfan 贫血的核糖体病有关，这主要是由于其在控制 p53 方面的核糖体外作用。

特异性

Ribosomal Protein L26 Antibody [L15C18] 可检测内源性 Ribosomal Protein L26 总蛋白水平。

背景

核糖体蛋白L26 (RPL26) 是真核生物核糖体中60S大亚基的保守组成部分，该亚基由大约80种不同的蛋白质组成。RPL26位于25S/5.8S rRNA结构域I中新生多肽出口通道附近，其结构与细菌L24蛋白相似。RPL26具有紧凑的折叠结构，其序列重复和rRNA结合基序对于稳定核仁中早期pre-60S组装中间体至关重要。尽管RPL26缺失只会导致rRNA构象发生轻微变化，而不会破坏相邻核糖体蛋白（如L39）的稳定性。 RPL26在p53 mRNA特异性翻译中也发挥着关键作用：在DNA损伤（例如紫外线或化疗药物引起的损伤）后，RPL26以高亲和力结合p53 mRNA的5'非翻译区，促进核糖体募集，使p53蛋白合成数倍增加，并通过诱导p21促进细胞周期阻滞和凋亡。RPL26的过表达可通过选择性地提高p53水平来模拟MDM2抑制的效果。RPL26有助于27S前体rRNA的最佳成熟和前体60S亚基的有效输出，即使在半聚体多聚核糖体存在的情况下也能确保野生型翻译的准确性，并作为一种传感器将核仁完整性与p53介导的肿瘤抑制联系起来。 RPL26 失调与类似 Diamond-Blackfan 贫血的核糖体病有关，这主要是由于其在控制 p53 方面的核糖体外作用。

使用信息

抗体应用

WB

稀释比例

WB

1:1000

反应性

Human, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

17 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 60 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 60 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Ribosomal Protein L26 Antibody [L15C18]

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使用信息

文献参考

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