Sec24D Antibody [P23J18] Datasheet

生物描述

特异性	Sec24D Antibody [P23J18] 可检测内源性 Sec24D 总蛋白水平。
背景	SEC24D（SEC24 同源物 D，COPII 外壳复合物组分）是 SEC24 基因亚家族的成员，编码 COPII（外壳蛋白复合物 II）机制的核心结构和功能元件，该机制介导新合成的蛋白质从内质网 (ER) 到高尔基体的囊泡运输。当小 GTP 酶 Sar1 与 Sec23/24 复合物相互作用时，COPII 外壳囊泡的组装启动，产生一种出芽前中间体，该中间体选择性地捕获待分泌的货物。在该复合物中，Sec24 亚基主要负责货物识别和选择，因为它直接作用于内质网腔内跨膜蛋白或可溶性蛋白上的特定输出信号。这些相互作用通过与 Sec23 的协同结合，确保货物有效地被整合到形成的 COPII 囊泡中。在人类中，已鉴定出四种不同的 Sec24 亚型——Sec24A、Sec24B、Sec24C 和 Sec24D，每种亚型都表现出独特但又相互重叠的货物特异性和组织表达谱。其中，SEC24D 在维持内质网到高尔基体运输的保真度方面发挥着至关重要的作用，有助于蛋白质的正常分选、分泌和细胞稳态。SEC24D 基因在肾透明细胞癌 (KIRC)、肺鳞状细胞癌 (LUSC) 和胃腺癌 (STAD) 患者的转移性肿瘤中过表达。

特异性

Sec24D Antibody [P23J18] 可检测内源性 Sec24D 总蛋白水平。

背景

SEC24D（SEC24 同源物 D，COPII 外壳复合物组分）是 SEC24 基因亚家族的成员，编码 COPII（外壳蛋白复合物 II）机制的核心结构和功能元件，该机制介导新合成的蛋白质从内质网 (ER) 到高尔基体的囊泡运输。当小 GTP 酶 Sar1 与 Sec23/24 复合物相互作用时，COPII 外壳囊泡的组装启动，产生一种出芽前中间体，该中间体选择性地捕获待分泌的货物。在该复合物中，Sec24 亚基主要负责货物识别和选择，因为它直接作用于内质网腔内跨膜蛋白或可溶性蛋白上的特定输出信号。这些相互作用通过与 Sec23 的协同结合，确保货物有效地被整合到形成的 COPII 囊泡中。在人类中，已鉴定出四种不同的 Sec24 亚型——Sec24A、Sec24B、Sec24C 和 Sec24D，每种亚型都表现出独特但又相互重叠的货物特异性和组织表达谱。其中，SEC24D 在维持内质网到高尔基体运输的保真度方面发挥着至关重要的作用，有助于蛋白质的正常分选、分泌和细胞稳态。SEC24D 基因在肾透明细胞癌 (KIRC)、肺鳞状细胞癌 (LUSC) 和胃腺癌 (STAD) 患者的转移性肿瘤中过表达。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:100

反应性

Human, Mouse, Rat, Monkey

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

115 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: MCF7, Lane 2: Hela, Lane 3: SK-OV-3, Lane 4: 3T3