SLC22A2/OCT2 Antibody [D23A15]

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生物描述

特异性 SLC22A2/OCT2 Antibody [D23A15] 可检测内源性 SLC22A2/OCT2 总蛋白水平。
背景 SLC22A2，又称有机阳离子转运蛋白2 (OCT2)，是SLC22家族中的一种多特异性易化转运蛋白（分子量约为63 kDa）。OCT2主要表达于肾近端小管细胞的基底外侧膜，具有12个跨膜结构域，形成一个内向的底物结合腔。它拥有一个大的胞外环2，其中包含糖基化位点以维持构象稳定性。关键残基如Asp449和Trp222对于阳离子识别和转运过程中质子化状态的调控至关重要。OCT2通过交替通路机制发挥作用，利用电化学梯度（通常为-50至-70 mV）进行转运，无需ATP或Na⁺偶联。该转运蛋白可双向转运有机阳离子，包括二甲双胍、顺铂、组胺、多巴胺和肌酐，其主要作用是将底物从肾小管细胞基底外侧摄取，进而进行定向分泌。OCT2 对较小的单价阳离子略有偏好（Km 10–500 μM），其转运依赖于底物阻塞触发的瞬时孔道开放，从而改变底物的可及性。与带正电荷的胺类的静电相互作用赋予了其阳离子选择性，而阴离子则被排除在外。该活性对于清除全身毒素、神经递质以及异生物质在肝脏、神经元和胎盘中的处置至关重要。常见的 OCT2 变异体（例如 R270S、A270S）会使某些底物的转运能力降低 20–50%，从而增加铂类化疗药物的肾毒性风险，并降低二甲双胍在糖尿病中的疗效。

使用信息

抗体应用 IHC, FCM 稀释比例
IHC FCM
1:40-1:125 1:4000
反应性 Human
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IHC
实验步骤：
 
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
 
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
 

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