SMARCA1 Antibody (Rabbit mAb) [N5C5] Datasheet

生物描述

特异性	SMARCA1 Antibody (Rabbit mAb) [N5C5] 可检测内源性 SMARCA1 总蛋白水平。
背景	SMARCA1（又名SNF2L）是一种哺乳动物ISWI家族ATPase，也是特定染色质重塑复合物的能量转换核心。这些复合物能够重新定位核小体，形成有序排列，并在复制、转录和修复过程中调控DNA的访问。该蛋白包含典型的解旋酶ATP结合结构域和解旋酶C端结构域，以及SANT结构域和ISWI型调控元件，这些元件将ATP水解与组蛋白八聚体的DNA和核小体依赖性滑动偶联。选择性剪接产生至少两种亚型：一种催化活性缺失，形成非重塑复合物；另一种具有解旋酶活性，作为ISWI复合物（如NURF和CERF）的催化亚基。在核小体重塑因子（NURF）复合物中，SMARCA1与大亚基BPTF及其他辅助因子协同作用，使位于DNA边缘和中心的核小体滑动，并结合Engrailed同源框基因En1和En2的启动子，正向调控它们的表达，从而支持中脑-后脑区域的脑发育和神经突生长。SMARCA1介导的NURF依赖性染色质重塑还通过改变T细胞发育所需基因的染色质结构，影响胸腺细胞向T细胞的分化。遗传学研究表明，最大的NURF亚基BPTF对于中胚层、内胚层和外胚层谱系的正常分化至关重要，这表明含有SMARCA1的NURF复合物参与小鼠胚胎发生过程中的胚层形成。 SMARCA1 还参与 CECR2 重塑因子 (CERF) 复合物的形成，在其中它与 CECR2 和 ISWI ATPase SMARCA5 形成组织特异性组装体；胚胎干细胞和睾丸中的 CERF 复合物以 ATP 依赖的方式重塑染色质，而 Cecr2 的功能丧失突变会导致神经管缺陷——无脑畸形，从遗传学上将 SMARCA1-CECR2 重塑活性与神经管形成和神经管闭合联系起来。泛癌生物信息学分析将 SMARCA1 归类为染色质重塑因子，它调节细胞从定向祖细胞向分化状态的转变。虽然与 SMARCA4 等 SWI/SNF ATPase 相比，SMARCA1 的改变相对较少见，但在某些癌中，SMARCA1 的表达和拷贝数变化与增殖信号和免疫相关通路相关，这表明 SMARCA1 依赖的核小体间距和启动子可及性以依赖于上下文的方式促进致癌转录程序。

特异性

SMARCA1 Antibody (Rabbit mAb) [N5C5] 可检测内源性 SMARCA1 总蛋白水平。

背景

SMARCA1（又名SNF2L）是一种哺乳动物ISWI家族ATPase，也是特定染色质重塑复合物的能量转换核心。这些复合物能够重新定位核小体，形成有序排列，并在复制、转录和修复过程中调控DNA的访问。该蛋白包含典型的解旋酶ATP结合结构域和解旋酶C端结构域，以及SANT结构域和ISWI型调控元件，这些元件将ATP水解与组蛋白八聚体的DNA和核小体依赖性滑动偶联。选择性剪接产生至少两种亚型：一种催化活性缺失，形成非重塑复合物；另一种具有解旋酶活性，作为ISWI复合物（如NURF和CERF）的催化亚基。在核小体重塑因子（NURF）复合物中，SMARCA1与大亚基BPTF及其他辅助因子协同作用，使位于DNA边缘和中心的核小体滑动，并结合Engrailed同源框基因En1和En2的启动子，正向调控它们的表达，从而支持中脑-后脑区域的脑发育和神经突生长。SMARCA1介导的NURF依赖性染色质重塑还通过改变T细胞发育所需基因的染色质结构，影响胸腺细胞向T细胞的分化。遗传学研究表明，最大的NURF亚基BPTF对于中胚层、内胚层和外胚层谱系的正常分化至关重要，这表明含有SMARCA1的NURF复合物参与小鼠胚胎发生过程中的胚层形成。 SMARCA1 还参与 CECR2 重塑因子 (CERF) 复合物的形成，在其中它与 CECR2 和 ISWI ATPase SMARCA5 形成组织特异性组装体；胚胎干细胞和睾丸中的 CERF 复合物以 ATP 依赖的方式重塑染色质，而 Cecr2 的功能丧失突变会导致神经管缺陷——无脑畸形，从遗传学上将 SMARCA1-CECR2 重塑活性与神经管形成和神经管闭合联系起来。泛癌生物信息学分析将 SMARCA1 归类为染色质重塑因子，它调节细胞从定向祖细胞向分化状态的转变。虽然与 SMARCA4 等 SWI/SNF ATPase 相比，SMARCA1 的改变相对较少见，但在某些癌中，SMARCA1 的表达和拷贝数变化与增殖信号和免疫相关通路相关，这表明 SMARCA1 依赖的核小体间距和启动子可及性以依赖于上下文的方式促进致癌转录程序。

使用信息

抗体应用

WB, IP

稀释比例

WB	IP
1:1000	1:100

反应性

Human, Monkey

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

121 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
WB	实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：200 mA, 120 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验方法

WB

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：200 mA, 120 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

文献参考

[1] Dai L, et al. PLoS One. 2022 Sep 20;17(9):e0274823.

Application Data

WB

Validated by Selleck

Lane 1: SW620, Lane 2: Saso2, Lane 3: HT29, Lane 4: Saso2