SSEA4 Antibody [E20H6]

目录号：F2673

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生物描述

特异性 SSEA4 Antibody [E20H6] 可检测内源性 SSEA4 总蛋白水平。
背景 SSEA4（阶段特异性胚胎抗原4）是一种唾液酸化的六糖糖脂表位（Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc-Cer），存在于人胚胎干细胞（hESCs）、诱导多能干细胞（iPSCs）、畸胎瘤细胞和癌症干细胞上，但在分化的体细胞或小鼠多能干细胞中不存在。其碳水化合物头部呈马蹄形构象，可通过氢键网络与MC813抗体结合，该氢键网络涉及末端唾液酸（Neu5Ac）羧基与Asp54H/Gly53H以及N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）羟基与Asp49L之间的相互作用。这种结构使其可用于通过流式细胞术和免疫组织化学方法特异性检测多能性状态。聚糖的刚性α-半乳糖苷键和β1-3糖苷键使其在质膜中神经酰胺脂质尾部保持稳定的延伸构象。SSEA4通过与LRP6共受体直接相互作用，调节Wnt/β-catenin信号通路，从而积极维持干细胞特性，实现配体非依赖性通路激活；此外，它还通过聚糖介导的聚集募集PI3K/Akt，维持对自我更新至关重要的Nanog/Oct4/Sox2信号通路。在分化过程中，糖基转移酶（ST3GAL6、B3GALT5）的下调逐渐去除末端唾液酸，使SSEA4转化为SSEA3，并丧失其信号传导能力。

使用信息

抗体应用 IF, FCM 稀释比例
IF FCM
1:100 - 1:400 1:200 - 1:800
反应性 Human
抗体类型 Mouse Monoclonal Antibody MW
储存液配方 PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
储存条件
(自收到货起)		 -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
IF
实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
 
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
 
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
 
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
 
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
 
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
 

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