TARC/CCL17 Antibody (Rabbit mAb) [P14H22] Datasheet

生物描述

特异性	TARC/CCL17 Antibody (Rabbit mAb) [P14H22] 可检测内源性 TARC/CCL17 总蛋白水平。
背景	CCL17最初被鉴定为胸腺和激活调节趋化因子，属于CC趋化因子亚家族，最初被证实是一种T细胞导向的趋化因子，在胸腺中组成型表达，并在有丝分裂原刺激后于外周血单核细胞中诱导表达。CCL17作为G蛋白偶联受体CCR4的高度特异性生物配体发挥作用，其结合需要趋化因子上的两个不同的结合位点，因为抗体阻断任一位点均可独立破坏CCR4信号传导并消除局部炎症反应的建立。CCR4主要表达于Th2细胞以及其他多种淋巴细胞亚群，包括表达皮肤淋巴细胞抗原的皮肤归巢T细胞、调节性T细胞、Th17和Th22细胞群。CCL17的结合驱动T细胞定向迁移并伴随细胞内钙动员。受体结合后，磷脂酶C依赖性、钙离子非依赖性机制对于T细胞迁移的定向成分至关重要，这区分了驱动运动的信号和伴随受体激活的钙离子流。此外，百日咳毒素在多种细胞系统中的敏感性表明，异源三聚体G蛋白偶联是趋化反应的基础。CCR4在配体结合后还会与β-arrestin结合。CCL17及其相关配体CCL22在受体内化和脱敏程度上存在差异，这种差异归因于CCR4至少存在两种结构不同的构象状态，这些状态决定了受体对重复或联合配体暴露的反应方式。除了CCR4之外，CCL17还通过CXCR4发出信号，激活PI3K、Akt和ERK通路，从而支持免疫细胞的细胞骨架重组和定向运动，扩展了该趋化因子的功能范围，使其超越了最初描述的受体。 CCL17由单核细胞和单核细胞衍生的树突状细胞在GM-CSF、IL-3和IL-4的刺激下产生，表皮角质形成细胞在IFN-γ、TNF-α及相关炎症细胞因子的刺激下于病变皮肤内产生CCL17，这表明局部组织产生的CCL17是CCR4阳性淋巴细胞募集至炎症部位的驱动因素。血清CCL17水平与特应性皮炎的临床严重程度和哮喘气道分泌物的增加密切相关，反映了该趋化因子在维持皮肤和肺部Th2型炎症中的作用。在实验模型中，CCR4阻断或CCL17中和可减少疾病相关的T细胞和嗜酸性粒细胞募集，这证实了CCL17-CCR4轴是过敏性和Th2型炎症性疾病治疗干预的有效靶点。

特异性

TARC/CCL17 Antibody (Rabbit mAb) [P14H22] 可检测内源性 TARC/CCL17 总蛋白水平。

背景

CCL17最初被鉴定为胸腺和激活调节趋化因子，属于CC趋化因子亚家族，最初被证实是一种T细胞导向的趋化因子，在胸腺中组成型表达，并在有丝分裂原刺激后于外周血单核细胞中诱导表达。CCL17作为G蛋白偶联受体CCR4的高度特异性生物配体发挥作用，其结合需要趋化因子上的两个不同的结合位点，因为抗体阻断任一位点均可独立破坏CCR4信号传导并消除局部炎症反应的建立。CCR4主要表达于Th2细胞以及其他多种淋巴细胞亚群，包括表达皮肤淋巴细胞抗原的皮肤归巢T细胞、调节性T细胞、Th17和Th22细胞群。CCL17的结合驱动T细胞定向迁移并伴随细胞内钙动员。受体结合后，磷脂酶C依赖性、钙离子非依赖性机制对于T细胞迁移的定向成分至关重要，这区分了驱动运动的信号和伴随受体激活的钙离子流。此外，百日咳毒素在多种细胞系统中的敏感性表明，异源三聚体G蛋白偶联是趋化反应的基础。CCR4在配体结合后还会与β-arrestin结合。CCL17及其相关配体CCL22在受体内化和脱敏程度上存在差异，这种差异归因于CCR4至少存在两种结构不同的构象状态，这些状态决定了受体对重复或联合配体暴露的反应方式。除了CCR4之外，CCL17还通过CXCR4发出信号，激活PI3K、Akt和ERK通路，从而支持免疫细胞的细胞骨架重组和定向运动，扩展了该趋化因子的功能范围，使其超越了最初描述的受体。 CCL17由单核细胞和单核细胞衍生的树突状细胞在GM-CSF、IL-3和IL-4的刺激下产生，表皮角质形成细胞在IFN-γ、TNF-α及相关炎症细胞因子的刺激下于病变皮肤内产生CCL17，这表明局部组织产生的CCL17是CCR4阳性淋巴细胞募集至炎症部位的驱动因素。血清CCL17水平与特应性皮炎的临床严重程度和哮喘气道分泌物的增加密切相关，反映了该趋化因子在维持皮肤和肺部Th2型炎症中的作用。在实验模型中，CCR4阻断或CCL17中和可减少疾病相关的T细胞和嗜酸性粒细胞募集，这证实了CCL17-CCR4轴是过敏性和Th2型炎症性疾病治疗干预的有效靶点。

使用信息

抗体应用

IHC

稀释比例

IHC

1:500

反应性

Human

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

11 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
IHC	实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

实验方法

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

文献参考

Application Data

IHC

Validated by Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human tonsil tissue with F5507 at 1:500 dilution.