TWIST1 Antibody (Rabbit mAb) [M21K22] Datasheet

生物描述

特异性	TWIST1 Antibody (Rabbit mAb) [M21K22] 可检测内源性 TWIST1 总蛋白水平。
背景	TWIST1属于B类碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）转录因子家族，在胚胎形态发生过程中作为中胚层形成和间充质分化的主要调控因子发挥作用。它通过其bHLH结构域结合靶基因启动子上的E-box调控序列。该蛋白可形成同源二聚体和异源二聚体。其中，TWIST1与A类bHLH因子E12形成的异源二聚体是主要的转录活性复合物，驱动着促转移基因程序；而TWIST1自身或其他B类伴侣（如HAND2）形成的同源二聚体则产生功能不同的结果。细胞内二聚体的选择主要取决于这些bHLH伴侣的相对可用性以及抑制性Id蛋白。Id蛋白通过竞争性结合螯合E12，从而主动重塑能够与DNA结合的TWIST1复合物库。与E12的异二聚化依赖于协同磷酸化，因为丝氨酸68位点磷酸化缺陷的TWIST1突变体选择性地损害了TWIST1-E12异二聚体的形成和下游靶基因的诱导，而TWIST1同二聚体的形成则不受影响。这表明磷酸化状态发挥着分子开关的作用，控制着哪种二聚体占主导地位，从而决定了执行哪种转录程序。一旦组装完成，TWIST1-E12异二聚体便通过直接抑制E-钙黏蛋白的表达来驱动上皮-间质转化。这种抑制是通过与MTA2和RbAp46相互作用，募集Mi-2/NuRD核小体重塑和去乙酰化酶复合物来实现的，这使得TWIST1的DNA结合与主动染色质重塑而非被动转录干扰相耦合。 TWIST1 还能与 TWIST-box 结构域结合，该结构域是一个独立的保守区域，可与 RUNX2 的 runt 结构域结合并抑制其转录激活活性。同时，TWIST1 也直接抑制 RUNX2 的表达，这些作用共同抑制了过早的成骨细胞分化，使 TWIST1 成为骨骼发育过程中成骨定向的关键调控点。在癌症环境中，TWIST1 驱动的上皮细胞扩散可以在细胞角蛋白表达和上皮细胞特性得以保留的情况下进行，此时 TWIST1 重编程的是细胞外基质和细胞-基质黏附基因，而非细胞-细胞黏附基因。这表明 TWIST1 促进肿瘤细胞扩散的机制并非仅仅依赖于 E-钙黏蛋白的丢失。 TWIST1 在乳腺癌、肝癌、前列腺癌和胃癌中表达升高，并受多种上游信号通路（包括 STAT3、HIF-1α 和 NF-κB）上调，与侵袭性和转移性表型相关；而影响 bHLH 结构域的杂合功能丧失突变会导致 Saethre-Chotzen 综合征（一种颅缝早闭疾病），这表明 TWIST1 的剂量和二聚化保真度是发育和致癌背景下的关键参数。

特异性

TWIST1 Antibody (Rabbit mAb) [M21K22] 可检测内源性 TWIST1 总蛋白水平。

背景

TWIST1属于B类碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）转录因子家族，在胚胎形态发生过程中作为中胚层形成和间充质分化的主要调控因子发挥作用。它通过其bHLH结构域结合靶基因启动子上的E-box调控序列。该蛋白可形成同源二聚体和异源二聚体。其中，TWIST1与A类bHLH因子E12形成的异源二聚体是主要的转录活性复合物，驱动着促转移基因程序；而TWIST1自身或其他B类伴侣（如HAND2）形成的同源二聚体则产生功能不同的结果。细胞内二聚体的选择主要取决于这些bHLH伴侣的相对可用性以及抑制性Id蛋白。Id蛋白通过竞争性结合螯合E12，从而主动重塑能够与DNA结合的TWIST1复合物库。与E12的异二聚化依赖于协同磷酸化，因为丝氨酸68位点磷酸化缺陷的TWIST1突变体选择性地损害了TWIST1-E12异二聚体的形成和下游靶基因的诱导，而TWIST1同二聚体的形成则不受影响。这表明磷酸化状态发挥着分子开关的作用，控制着哪种二聚体占主导地位，从而决定了执行哪种转录程序。一旦组装完成，TWIST1-E12异二聚体便通过直接抑制E-钙黏蛋白的表达来驱动上皮-间质转化。这种抑制是通过与MTA2和RbAp46相互作用，募集Mi-2/NuRD核小体重塑和去乙酰化酶复合物来实现的，这使得TWIST1的DNA结合与主动染色质重塑而非被动转录干扰相耦合。 TWIST1 还能与 TWIST-box 结构域结合，该结构域是一个独立的保守区域，可与 RUNX2 的 runt 结构域结合并抑制其转录激活活性。同时，TWIST1 也直接抑制 RUNX2 的表达，这些作用共同抑制了过早的成骨细胞分化，使 TWIST1 成为骨骼发育过程中成骨定向的关键调控点。在癌症环境中，TWIST1 驱动的上皮细胞扩散可以在细胞角蛋白表达和上皮细胞特性得以保留的情况下进行，此时 TWIST1 重编程的是细胞外基质和细胞-基质黏附基因，而非细胞-细胞黏附基因。这表明 TWIST1 促进肿瘤细胞扩散的机制并非仅仅依赖于 E-钙黏蛋白的丢失。 TWIST1 在乳腺癌、肝癌、前列腺癌和胃癌中表达升高，并受多种上游信号通路（包括 STAT3、HIF-1α 和 NF-κB）上调，与侵袭性和转移性表型相关；而影响 bHLH 结构域的杂合功能丧失突变会导致 Saethre-Chotzen 综合征（一种颅缝早闭疾病），这表明 TWIST1 的剂量和二聚化保真度是发育和致癌背景下的关键参数。

使用信息

抗体应用

IHC

稀释比例

IHC

1:250 - 1:1000

反应性

Mouse

抗体类型

Rabbit Monoclonal Antibody

MW

21 kDa

储存液配方

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件
(自收到货起)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法
IHC	实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

实验方法

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

文献参考

Application Data

IHC

Validated by Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse uterine tissue with F5951 at 1:250 dilution.