Collagen V Antibody [L8G6]
目录号: F4034
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Rat articular cartilage
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 反应性 |
|---|
| Mouse, Rat, Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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184 kDa
145 kDa,32 kDa, 36 kDa
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | Rat placenta organ culture supernatant; Rat articular cartilage tissue; Mouse articular cartilage tissue; Mouse articular cartilage organ culture supernatant |
|---|---|
| 阴性对照 | Mouse PBMCs |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
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| Collagen V Antibody [L8G6] 可检测内源性 Collagen V 总水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞外基质，细胞外环境 |
| Uniprot ID |
|---|
| P20908; P25940; P05997 |
| 克隆号 |
|---|
| L8G6 |
| 别名 |
|---|
| Collagen alpha‑2(V) chain; COL5A2 |
| 背景 |
|---|
| V型胶原蛋白（COLV）是一种次要的纤维状胶原蛋白，由两条α1(V)链和一条α2(V)链组成异源三聚体分子，在皮肤、肌腱、角膜和巩膜等组织中，它作为I型胶原蛋白纤维形成和细胞外基质组织的主要调节因子发挥作用。COLV与I型胶原蛋白共同组装成异型纤维，其部分加工的N端结构域从纤维表面突出，限制I型胶原蛋白纤维的直径、堆积和横向排列，从而控制结缔组织的生物力学特性和散射特性。在基质中，COLV与其他胶原蛋白、蛋白聚糖（如核心蛋白聚糖和双糖蛋白聚糖）以及结构蛋白相互作用，精细调节纤维结构和力学各向异性，同时还与细胞表面整合素结合，调节成纤维细胞和其他基质细胞中的黏着斑形成、细胞骨架张力和力学转导。 V型胶原蛋白还与TGF-β信号通路和Wnt/β-catenin通路相互作用，影响发育和修复过程中祖细胞的增殖、分化和基质重塑。COL5A1或COL5A2基因的功能缺失突变会破坏V型胶原蛋白依赖的纤维形成，导致典型的埃勒斯-当洛斯综合征，其特征为皮肤过度伸展、异常瘢痕形成和关节过度活动。在纤维化和病理状态下，V型胶原蛋白表达异常升高，伴随肺、肾、皮肤和脂肪组织中纤维状胶原蛋白的过度沉积和基质硬化，因此，在遗传性结缔组织疾病和获得性纤维化疾病中，V型胶原蛋白依赖的基质组织和机械信号传导最终都会失调。 |
| 参考文献 |
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