Poly FLAG多肽

Poly FLAG多肽(3X Flag多肽)是一种由23个氨基酸组成，分子量为2864 Da的多肽，能够通过竞争性结合Anti-Flag抗体，从而在免疫沉淀时洗脱与Anti-Flag抗体结合的Flag融合表达蛋白。多肽中Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp这一基序重复三次，在碳端的8个氨基酸组成了经典的Flag标签 (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)。

产品性质

应用

主要用于结合到溶液中Anti-Flag单克隆抗体上的或者结合到Anti-Flag亲和凝胶上的FLAG融合蛋白竞争性的洗脱下来。

注意事项

1. 使用前认真阅读使用说明；

2. 在使用及储存亲和凝胶时避免冻融，干燥或者高速离心；

3. 该产品仅用于科学研究，不能用于药物及其他用途。

操作流程

适用于从Anti-Flag亲和凝胶上进行FLAG融合蛋白的洗脱。

1. 将Flag亲和凝胶彻底重悬，并迅速转移10 μL（大约包含了5 μL的凝胶珠）的凝胶重悬液到新的EP管中；

2. 加入0.6 mL的TBS缓冲液，使用移液枪混匀。5000 rpm离心30s，去除上清。重复3-4次，确保去除所有的洗涤液；

3. 加入500 μL的细胞裂解液到洗涤过的凝胶中；

4. 在要4°C摇床上孵育2h进行结合；

5. 5000 rpm离心30s，上清液转移到新的离心管中保存以后检测。

6. 上步中得到的沉淀用 0.5 ml TBS缓冲液洗3-4次，至上清液中 OD280 小于 0.05 为止。

7. 通过竞争性Poly FLAG多肽将FLAG融合蛋白进行洗脱。

8. Anti-Flag亲和凝胶回收。
Poly FLAG多肽可能难以将所有的FLAG融合蛋白全部洗脱下来，建议通过使用5 mL的0.1 M glycine HCl（pH 3.5）缓冲液洗涤三次，将Anti-Flag亲和凝胶进行回收。回收后的Anti-Flag亲和凝胶立即使用TBS缓冲液进行平衡直到流出液pH值呈中性。
注意：不要让Anti-Flag亲和凝胶留在glycine HCl缓冲液中超过20min。

9. 保存Anti-Flag亲和凝胶。
使用5 mL缓冲液1（50% glycerol，10mM sodium phosphate，150 mM sodium chloride，0.02% (w/v) 叠氮化钠，pH 7.4）洗涤Anti-Flag亲和凝胶三次，然后加入5 mL缓冲液2 （50% glycerol，10 mM sodium phosphate，150 mM sodium chloride，0.02% (w/v) 叠氮化钠，pH 7.4）并储存于-20°C避免干掉。