小鼠CD4+ T细胞分选试剂盒

仅限科研使用

小鼠CD4+ T 细胞分选试剂盒采用磁珠进行阴性分选,从小鼠脾脏或淋巴结的单细胞悬液中分离出 CD4+ T 细胞(不适用于分选naive CD4+ T 细胞)。

小鼠CD4+ T细胞分选试剂盒

产品优势

简单、快速:15分钟内即可分选完成

无需分离柱:磁性分离器即可实现分离

纯度高:细胞纯度95%以上

活性高:细胞功能良好,无抗体和磁珠标记

质控严格:粒径控制,表面修饰控制

客户使用该产品的1个实验数据:

价格对比

产品描述

小鼠CD4+ T 细胞分选试剂盒采用磁珠进行阴性分选,从小鼠脾脏或淋巴结的单细胞悬液中分离出 CD4+ T 细胞(不适用于分选naive CD4+ T 细胞)。原理是选用不同的生物素(biotin)标记单克隆抗体对非目标细胞(非CD4+ T 细胞)进行标记,而后通过链霉亲和素(streptavidin)标记的磁珠对非目标细胞进行清除,从而达到小鼠CD4+ T 细胞分选的目的。分选过程需要用到磁力架。

应用范围

分选小鼠脾脏CD4+ T细胞

分选小鼠淋巴结CD4+ T细胞

应用范围

从 C57BL/6 小鼠脾脏细胞中分选 CD4+ T 细胞,分选前后的细胞用 FITC anti-mouse CD4 抗体(克隆号GK1.5)标记后进行流式细胞仪分析,分选前后的CD4+ T 细胞纯度分别为 20.3%和 98.8%。

产品组成

B90001 组分 装量(For 109 cell)
Biotin-Antibody Mix 200 μl
Streptavidin 2 ml

储存条件(自收到货起)

2-8°C下稳定保存,有效期2年,不可冷冻。

实验方法

以分选小鼠脾脏CD4+ T 细胞为例

1. 制备单细胞悬液:在70 μm细胞筛网上研磨脾脏,以预冷的PBS冲洗细胞筛网,收集细胞悬液于50 ml离心管中,500 g,离心5 min。
2. 离心完成后,弃上清,加入5 ml ACK红细胞裂解液,室温裂解5 min,再加入20 ml PBS,500 g,离心5 min。
注意:红细胞裂解步骤可根据所用裂解液不同调整用量及时间。少量红细胞残留不会影响后续分选及细胞纯度。
3. 离心完成后,弃上清,将脾细胞重悬于PBS,细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤后,计数。计数完成后,继续以500 g,离心5 min。
4. 离心完成后,弃上清,将细胞重悬于分选buffer中,调整细胞密度为1×108 cells/ml。
注意:分选buffer为含有2 mM EDTA和2%胎牛血清(FBS)的 PBS 或者含有 2mM EDTA 和 0.5% BSA 的 PBS,需预先通过 0.22 μm 滤膜过滤除菌。
5. 将 100 μl细胞悬液(1×107 个细胞)加入无菌流式管底部,再加入2 μl Biotin-Ab Mix,混匀后4℃孵育10 min。
注意:加入细胞悬液时将细胞加入流式管底部,避免沿流式管管壁加入。根据所使用磁力架特点也可使用离心管进行细胞分选。如果分选更多细胞,则按比例增加Biotin-Ab Mix用量。
6. 孵育完成后,在流式管中加入20 μl Streptavidin beads(使用前涡旋振荡重悬磁珠),混匀后4℃孵育10 min。孵育过程中应轻轻敲打管壁1~2次,防止细胞和beads沉降。
注意:如果分选更多细胞,则按比例增加Streptavidin beads用量。例如分选5×107细胞,则应在500 μl细胞悬液中加入10 μl Biotin-Ab Mix和100 μl Streptavidin beads。如果分选少于1×107 个细胞,则将细胞悬液体积补至100 μl,使用2 μl Biotin-Ab Mix和20 μl Streptavidin beads。
7. 孵育完成后,在流式管加入2.5 ml分选buffer,以移液器上下混合吹打5次混匀(避免剧烈振荡或者上下颠倒混匀)。
8. 将含有细胞的分选流式管置于磁力架上(若没有合适的磁力架,可将流式管中液体转移到15 mL离心管中再置于磁力架上),静置5 min。
9. 将细胞悬液轻柔倒入无菌离心管中(倾倒过程中流式管不要脱离磁力架)或用吸管吸入离心管中(勿将液体吸尽,防止吸到磁珠),500 g,离心5 min。细胞悬液中即包含纯化的小鼠CD4+ T细胞,离心后弃上清,收集细胞。
10. 根据实验需要洗涤细胞后,将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中,即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。

常见问题及解决方法

常见问题 可能原因 对策
分选细胞纯度不高 长期存储或存储条件不当导致试剂失活 使用新的试剂盒
组织研磨不充分 增加研磨时间
细胞悬液中有组织和细胞团块 使用细胞筛网过滤细胞
分选细胞数量少 组织研磨不充分 增加研磨时间
加入试剂体积不足 参照说明书按细胞数量级调整试剂体积

技术支持

* 必填

请输入您的姓名
请输入您的邮箱 请输入有效的邮箱
请留言
在线咨询
联系我们