Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

仅限科研使用

Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)细胞活性检测试剂为一瓶即开即用的溶液,该试剂安全,无放射性,性价比高,为客户提供方便、快速、可靠的使用体验。

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

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产品优势

检测方法 CCK-8 (WST®-8) WST-1 XTT/MTS MTT
灵敏度 +++++ +++ +++ +
检测耗时 0.75h 0.75h 2.5h 3.75h
便捷程度 +++++ +++ +++ +

价格对比

产品描述

Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)是一种氧化还原反应的指示剂,在电子载体1-Methoxy PMS存在的条件下,利用活细胞中的脱氢酶催化四唑盐WST®-8生成甲臜染料(图1),而且甲臜染料的生成量与活细胞的数量成线性关系(图2)。该试剂的灵敏度高于MTT、XTT、MTS或WST-1等其他四唑盐。
Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)细胞活性检测试剂为一瓶即开即用的溶液,该试剂安全,无放射性,性价比高,为客户提供方便、快速、可靠的使用体验。

图1: Working mechanisms of Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

图2: 使用Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)进行细胞计数和OD值的比较。按不同的密度将K562和Hela细胞接种在96孔板的100 μl培养基中(每个样品进行三个重复). 培养16h后,在孔中添加10 μl Cell Counting Kit-8 (CCK-8),并在培养箱按指定时间进行孵育。用培养基作为空白对照,在酶标仪450 nm下检测光吸收值。

图3: 使用Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)进行细胞计数和OD值的比较。按不同的密度将HEK293细胞接种在96孔板的100 μl培养基中(每个样品进行三个重复). 培养16h后,在孔中添加10 μl Cell Counting Kit-8 (CCK-8),并在培养箱按指定时间进行孵育。用培养基作为空白对照,在酶标仪450 nm下检测光吸收值。

储存条件(自收到货起)

Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)在避光条件下可在室温保存6个月,2-8°C保存2年,-20°C及以下可保存更长时间。

实验方法

需要的实验器材

• 酶标仪
• 多道移液器
• 3 % SDS(可选)

实验步骤

1) 接种细胞于培养瓶并使之生长4–24小时,然后开始检测。
2) 在细胞培养液中直接加入1/10体积的Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8),充分混合,保证孔中颜色均一性,但不可有气泡产生。对96孔板,每100µl培养液加入10µl活性检测试剂。
3) 继续培养1-4小时至颜色变为橙色,如细胞密度/活力过低,可适当延长培养时间至24小时,但需注意不可孵育过度。
4) 用酶标仪读取450nm光吸收值。典型的OD值在0.8-1.5之间,但0.5-2.5都是可接受的范围。
注意:在添加Cell Counting Kit-8 (CCK-8)的细胞培养基中,在450nm处会有轻微的自发吸收值。该荧光背景随培养基、pH值、培养时间、暴露于光线的时间等因素的变化而变化。典型的吸收值在孵育2小时后为0.1-0.2。为了纠正背景,准备一个或多个无细胞的对照孔,计算其平均的荧光值,然后从试验孔中扣除该值。
5) 可选步骤:在100μl细胞中加入10 μl 3 % SDS 以终止反应,可在3天内读取数据。
6) 细胞活力计算:
细胞活力*(%)=[A(药物+)— A(空白)] / [A(药物—)— A(空白)] ×100%
A(药物+):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度;
A(药物—):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度;
A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度。
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

实验简要流程

应用领域

1) 细胞增殖测定——Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)具有水溶性、稳定性好、无细胞毒性。
2) 细胞活力检测——细胞代谢活力与橙色的产生随细胞活力的变化而变化。
3) 细胞因子实验——测定细胞因子诱导的细胞增殖,克隆形成及生长。
4) 细胞毒性实验——有毒的化学物质会导致细胞死亡,但死亡的细胞不会还原WST8,只有剩余的活细胞能够显色。Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)本身对细胞无毒性。

注意事项

1. 使用前请充分混匀,避免反复冻融。
2. 如果长时间孵育(过夜),请确保在试剂添加与孵育期间维持无菌状态。细菌也能够是本试剂显色。
3. 使用本品必须包含阳性、阴性和无细胞(纯培养液)对照。
4. 本产品只能用于研究,不能用于药物、日常生活等其他方面。

技术支持

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