Cre Recombinase Antibody [D11J17]

目录号: F0677

抗体应用：反应性：All Species Expected

Lane 1: 293T (mock-transfected), Lane 2: 293T (transfected with Cre recombinase)

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IHC1:50-1:200 IF1:800 FCM1:50-1:200

抗体应用
WB, IHC, IF, FCM

反应性
All Species Expected

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
37 kDa

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Cre Recombinase Antibody [D11J17] 可检测转染和转基因的 Cre Recombinase 总蛋白水平。

克隆号
D11J17

别名
Cyclization recombination; Cre

背景
Cre重组酶是一种来自噬菌体P1的IB型拓扑异构酶，它通过在loxP位点进行保守的位点特异性重组，将病毒基因组维持在低拷贝质粒中。该蛋白呈V形单体结构，包含一个N端DNA结合域，该域具有螺旋-转角-螺旋基序，可识别两侧由8个碱基对不对称间隔区组成的13个碱基对反向重复序列；N端DNA结合域通过一个柔性连接子与一个C端催化域相连，该催化域包含酪氨酸亲核试剂和保守的RHR三联体，后者对于磷酸二酯键的水解至关重要。重组起始于两个Cre单体结合每个loxP半位点，使DNA发生90度急剧弯曲，并通过分子间四螺旋束界面形成突触四聚体，该界面使切割位点呈反式排列，从而形成霍利迪连接。催化酪氨酸攻击间隔区和重复序列之间的可切割磷酸基团，生成3'-磷酸酪氨酸共价中间体，而互补链保持完整。随后，未切割的双链绕霍利迪连接轴旋转，完成链交换，从而解决第一个半反应。异构化作用重新定位活性位点，以进行第二链的切割和连接，从直接重复序列或头对头loxP方向的反转中产生切除的环状产物。间隔区的兼容性确保了链选择性，并防止非等位基因重组。即使没有宿主因子，反应效率仍然很高，但镁离子可以稳定过渡态，而四聚体的稳定性决定了重组的方向性。Cre辅助蛋白等辅助因子可以调节体内突触的形成。真核表达后普遍的核定位使得可以通过启动子驱动的变体实现组织特异性的基因激活或敲除，而自切除盒则最大限度地减少了插入突变。生殖系模型中失调的持续重组是脱靶整合的基础，而温度敏感突变体则有助于谱系追踪的时间控制。

背景

Cre重组酶是一种来自噬菌体P1的IB型拓扑异构酶，它通过在loxP位点进行保守的位点特异性重组，将病毒基因组维持在低拷贝质粒中。该蛋白呈V形单体结构，包含一个N端DNA结合域，该域具有螺旋-转角-螺旋基序，可识别两侧由8个碱基对不对称间隔区组成的13个碱基对反向重复序列；N端DNA结合域通过一个柔性连接子与一个C端催化域相连，该催化域包含酪氨酸亲核试剂和保守的RHR三联体，后者对于磷酸二酯键的水解至关重要。重组起始于两个Cre单体结合每个loxP半位点，使DNA发生90度急剧弯曲，并通过分子间四螺旋束界面形成突触四聚体，该界面使切割位点呈反式排列，从而形成霍利迪连接。催化酪氨酸攻击间隔区和重复序列之间的可切割磷酸基团，生成3'-磷酸酪氨酸共价中间体，而互补链保持完整。随后，未切割的双链绕霍利迪连接轴旋转，完成链交换，从而解决第一个半反应。异构化作用重新定位活性位点，以进行第二链的切割和连接，从直接重复序列或头对头loxP方向的反转中产生切除的环状产物。间隔区的兼容性确保了链选择性，并防止非等位基因重组。即使没有宿主因子，反应效率仍然很高，但镁离子可以稳定过渡态，而四聚体的稳定性决定了重组的方向性。Cre辅助蛋白等辅助因子可以调节体内突触的形成。真核表达后普遍的核定位使得可以通过启动子驱动的变体实现组织特异性的基因激活或敲除，而自切除盒则最大限度地减少了插入突变。生殖系模型中失调的持续重组是脱靶整合的基础，而温度敏感突变体则有助于谱系追踪的时间控制。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12954782/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39029281/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%