GRIM19 Antibody [J7L19]
目录号: F7268
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Daudi, Lane 2: TT, Lane 3: HepG2, Lane 4: VCaP
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 反应性 |
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| Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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16 kDa
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| 阳性对照 | Daudi cells; TT cells; RPMI 8226 cells; Hep G2 cells; OVSAH0 cells; VCaP cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| GRIM19 Antibody [J7L19] 可检测内源性 GRIM19 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 内膜系统，线粒体，线粒体内膜，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9P0J0 |
| 克隆号 |
|---|
| J7L19 |
| 别名 |
|---|
| NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 alpha subcomplex subunit 13; Gene associated with retinoic and interferon-induced mortality 19 protein; GRIM-19; NDUFA13 |
| 背景 |
|---|
| GRIM19，又名NDUFA13，是线粒体复合物I中NADH:泛醌氧化还原酶复合物的组成部分，其核编码亚基对于氧化磷酸化过程中NADH向泛醌的电子传递以及维持线粒体膜电位至关重要。该蛋白呈紧凑的螺旋束结构，锚定于复合物I的基质臂外周，其LYR基序定位于此，以稳定Q模块，并促进FMN还原与醌结合口袋动力学之间的构象耦合，从而驱动质子泵入线粒体内膜。I型干扰素和视黄酸通过IRF/STAT启动子元件上调GRIM19的表达，GRIM19通过直接结合STAT3的磷酸酪氨酸尾部来拮抗STAT3二聚化，从而阻断c-Myc和Bcl-xL等存活基因的核转位和转录激活，同时通过Bax寡聚化使细胞对凋亡更加敏感。 GRIM19通过构象门控协调铁硫簇从N模块的传递，防止逆向电子传递过程中活性氧（ROS）泄漏，并与NLRP3炎症小体调控相互作用。GRIM19的缺失会导致线粒体ROS（mtROS）水平升高，激活caspase-1和gasdermin D孔道形成，从而增强巨噬细胞和肝细胞中IL-1β/IL-33的分泌。GRIM19的缺失会通过损害SHP-1/TGF-β轴破坏胎儿造血干细胞分化和成体静止状态。在壁细胞中，GRIM19的缺乏会触发ROS-NRF2-HO-1-NF-κB信号通路，从而促进NLRP3依赖性解痉多肽表达的化生。GRIM19的过表达则通过将PPARγ共激活因子-1α转向产热程序来促进棕色脂肪分化，从而对抗饮食诱导的肥胖。 |
| 参考文献 |
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