hnRNP L Antibody [G15K5]
目录号: F5755
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: HepG2, Lane 2: A-673, Lane 3: NIH/3T3, Lane 4: COS7
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
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| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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60 kDa, 66 kDa
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| 阳性对照 | Hep G2 cells; A‑673 cells; HCC1143 cells; Caki‑1 cells; NIH/3T3 cells; COS‑7 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| hnRNP L Antibody [G15K5] 可检测内源性 hnRNP L 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| P14866 |
| 克隆号 |
|---|
| G15K5 |
| 别名 |
|---|
| Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L; HNRNPL |
| 背景 |
|---|
| hnRNP L 属于异质核糖核蛋白家族，该家族对于协调前体 mRNA 加工途径至关重要，这些途径包括剪接、多聚腺苷酸化以及 mRNA 输出至细胞质。该蛋白包含四个 RNA 识别基序，可选择性地与靶转录本中的富含 CA 序列和 CA 重复序列结合，同时还包含富含脯氨酸的区域，这些区域介导蛋白质-蛋白质相互作用，从而在新生 RNA 上组装成复合物。与这些基序的结合可指导多种剪接结果，例如内含子保留、盒式外显子包含或跳跃以及通过与其他调控因子（如 PTB）的组合控制实现的多外显子抑制，同时还影响可变多聚腺苷酸化位点的选择，从而调节 3' 末端的形成。 hnRNP L 聚集并与 p53 mRNA 的 5' 非翻译区 (5' UTR) 结合，通过构象调整增强其翻译，促进核糖体扫描和起始，从而提高 p53 蛋白水平，进而激活下游靶点，例如 p21（导致 G2/M 期阻滞）和 Puma（导致细胞凋亡）。在应激条件下，hnRNP L 会发生胞质转位，使其能够在核功能之外，进一步精细调控与生存相关的 mRNA 的翻译。hnRNP L 通过剪接自身前体 mRNA 和旁系同源物 hnRNP LL 的前体 mRNA，实现自身调控和交叉调控，从而维持其在不同组织中的表达平衡。在前列腺癌组织中，hnRNP L 的过表达与疾病进展相关，此时 hnRNP L 与 p53 mRNA 相互作用，改变细胞周期蛋白 D1 和 p21 的平衡，促进 S 期进程和细胞增殖，同时抑制细胞凋亡。 |
| 参考文献 |
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