Human Dectin-1/CLEC7A Antibody [J4K7]

目录号: F3828

抗体应用：反应性：Human

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例
IF1:40-1:125 FCM1:400

抗体应用
IF, FCM

反应性
Human

抗体类型
Mouse Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

阳性对照	Mature human dendritic cells
阴性对照

实验方法

IF
实验步骤：样品准备 1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。 2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。 3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。 4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。固定 1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。通透 1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。） 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。封闭添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。免疫荧光染色（第一天） 1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。 2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。免疫荧光染色（第二天） 1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。 3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。 5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。封片 1. 抗荧光淬灭封片剂封片。 2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。 3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

实验步骤：

样品准备

1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。

2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。

3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。

4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。

固定

1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

通透

1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。

（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

封闭

添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）

注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。

免疫荧光染色（第一天）

1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。

2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。

免疫荧光染色（第二天）

1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。

3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。

5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。

封片

1. 抗荧光淬灭封片剂封片。

2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。

3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Human Dectin-1/CLEC7A Antibody [J4K7] 可检测内源性 Human Dectin-1/CLEC7A 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞膜，细胞质，内膜系统

Uniprot ID
Q9BXN2

克隆号
J4K7

别名
Beta-glucan receptor; BGR; CD369; CLEC7A; CLECSF12; CLECSF12DC-associated C-type lectin 1; superfamilymember 12; C-type lectin domain family 7 member A

背景
人Dectin-1 (CLEC7A) 是一种II型跨膜C型凝集素受体 (CLR)，主要表达于髓系细胞，包括单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞，是先天免疫中真菌β-葡聚糖的主要模式识别受体。它包含一个胞外碳水化合物识别结构域 (CRD)，短亚型缺乏茎状结构，其由W221、N242和E248残基形成的浅的、溶剂暴露的结合槽，通过Ca²⁺非依赖性的凝集素样相互作用（由疏水堆积和氢键支持）与酵母和分枝杆菌细胞壁中的β-1,3/β-1,6-葡聚糖聚合物结合。该受体包含一个跨膜螺旋和一个短的胞质尾，胞质尾上带有一个非常规的半ITAM基序（E²YSEI），而非经典的ITAM或ITIM基序。配体结合后，Dectin-1聚集在富含胆固醇的膜纳米结构域内，从而募集Src家族激酶（SFKs）磷酸化半ITAM酪氨酸残基，磷酸化后的酪氨酸残基进而通过其双SH2结构域募集Syk激酶。这导致CARD9/Bcl10/MALT1复合物的结合，并随后激活NF-κB p65，进而驱动IL-12、IL-23、IL-6和TNF-α等促炎细胞因子的产生。与TLR2的共定位协同增强MAPK信号通路（p38、ERK、JNK）以及通过NOX2产生的活性氧（ROS）。较长的Dectin-1亚型包含一个茎区，它通过促进CRD的多价性和有效的真菌吞噬作用，从而实现酵母聚糖的吞噬。Syk-CARD9-NF-κB信号通路协调Th17介导的针对念珠菌和曲霉菌等病原体的免疫反应，而茎区的O-糖基化（T105唾液酸核心1）则反常地作为血小板CLEC-2的配体，从而抑制感染期间的血栓形成。

背景

人Dectin-1 (CLEC7A) 是一种II型跨膜C型凝集素受体 (CLR)，主要表达于髓系细胞，包括单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞，是先天免疫中真菌β-葡聚糖的主要模式识别受体。它包含一个胞外碳水化合物识别结构域 (CRD)，短亚型缺乏茎状结构，其由W221、N242和E248残基形成的浅的、溶剂暴露的结合槽，通过Ca²⁺非依赖性的凝集素样相互作用（由疏水堆积和氢键支持）与酵母和分枝杆菌细胞壁中的β-1,3/β-1,6-葡聚糖聚合物结合。该受体包含一个跨膜螺旋和一个短的胞质尾，胞质尾上带有一个非常规的半ITAM基序（E²YSEI），而非经典的ITAM或ITIM基序。配体结合后，Dectin-1聚集在富含胆固醇的膜纳米结构域内，从而募集Src家族激酶（SFKs）磷酸化半ITAM酪氨酸残基，磷酸化后的酪氨酸残基进而通过其双SH2结构域募集Syk激酶。这导致CARD9/Bcl10/MALT1复合物的结合，并随后激活NF-κB p65，进而驱动IL-12、IL-23、IL-6和TNF-α等促炎细胞因子的产生。与TLR2的共定位协同增强MAPK信号通路（p38、ERK、JNK）以及通过NOX2产生的活性氧（ROS）。较长的Dectin-1亚型包含一个茎区，它通过促进CRD的多价性和有效的真菌吞噬作用，从而实现酵母聚糖的吞噬。Syk-CARD9-NF-κB信号通路协调Th17介导的针对念珠菌和曲霉菌等病原体的免疫反应，而茎区的O-糖基化（T105唾液酸核心1）则反常地作为血小板CLEC-2的配体，从而抑制感染期间的血栓形成。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35237264/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33588306/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%