JARID1C Antibody [J9D7]
目录号: F5827
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: NCCIT
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
建议曝光 90s 以上。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
建议曝光 90s 以上。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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180 kDa
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| 阳性对照 | NCCIT cells; F9 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。 (建议曝光时长 90s 以上)。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| JARID1C Antibody [J9D7] 可检测内源性 JARID1C 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| P41229 |
| 克隆号 |
|---|
| J9D7 |
| 别名 |
|---|
| Lysine-specific demethylase 5C; Histone demethylase JARID1C; Jumonji/ARID domain-containing protein 1C; Protein SmcX; Protein Xe169; [histone H3]-trimethyl-L-lysine(4) demethylase 5C; KDM5C; DXS1272E; JARID1C; SMCX; XE169 |
| 背景 |
|---|
| JARID1C（也称为KDM5C或SMCX）是JARID1/KDM5家族的组蛋白去甲基酶，属于含有JmjC结构域的赖氨酸去甲基化酶家族，其功能是特异性去除H3K4me3/me2转录激活标记。它包含一个JmjC催化结构域、一个JmjN结构域、一个BRIGHT结构域、一个C5HC2锌指区以及多个PHD结构域，这些结构域能够结合甲基化的组蛋白尾部，包括H3K4me3。这些模块共同作用，使其能够以序列特异性的方式募集到染色质上，并协同调控靶启动子。 JARID1C是抑制复合物的核心组成部分，该复合物包括HDAC1、HDAC2、G9a（EHMT2）和转录因子REST。通过这种相互作用，JARID1C结合非神经元细胞和干细胞中的REST反应元件，从而沉默神经元特异性基因，例如BDNF、SCG10和SCN2A，进而阻止神经元过早分化并维持非神经元谱系特性。JARID1C通过去除这些位点的H3K4me3和H3K4me2甲基化，降低RNA聚合酶II的结合位点和转录活性，使其酶活性与染色质浓缩的低表达状态直接相关。在人类中，JARID1C基因位于X染色体上，其突变与X连锁智力障碍、身材矮小、反射亢进和癫痫相关。许多致病变异定位于JmjC结构域，损害去甲基化酶活性或复合物结合能力。在包括透明细胞肾细胞癌在内的多种癌症中，JARID1C功能降低与促生长基因位点的去抑制和基因组不稳定性相关；在其他情况下，JARID1C已被证实能够抑制HPV E6/E7癌基因。 |
| 参考文献 |
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