LYVE1 Antibody [C2N8]

目录号: F3820

抗体应用：反应性：Mouse

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

本抗体需使用抗大鼠二抗。

使用信息

稀释比例
FCM1:10000

抗体应用
IHC, IF, FCM

反应性
Mouse

抗体类型
Rat Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

阳性对照	Mouse intestine
阴性对照

实验方法

IF
实验步骤：样品准备 1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。 2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。 3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。 4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。固定 1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。通透 1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。） 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。封闭添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。免疫荧光染色（第一天） 1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。 2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。免疫荧光染色（第二天） 1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。 3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。 5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。封片 1. 抗荧光淬灭封片剂封片。 2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。 3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

实验步骤：

样品准备

1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。

2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。

3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。

4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。

固定

1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

通透

1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。

（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

封闭

添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）

注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。

免疫荧光染色（第一天）

1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。

2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。

免疫荧光染色（第二天）

1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。

3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。

5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。

封片

1. 抗荧光淬灭封片剂封片。

2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。

3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

IHC
实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
LYVE1 Antibody [C2N8] 可检测内源性 LYVE1 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞膜，内膜系统

Uniprot ID
Q9Y5Y7

克隆号
C2N8

别名
cell surface retention sequence binding protein-1; Cell surface retention sequence-binding protein 1; CRSBP-1; extra cellular link domain-containing 1; LYVE-1; sLyve 1; sLyve1; soluble LYVE 1; soluble LYVE1; 1200012G08Rik; Crsbp-1; Crsbp1; Lyve-1; Lyve1; Xlkd1

背景
LYVE1（淋巴管内皮透明质酸受体1）是一种I型整合膜糖蛋白，是CD44的同源物，主要表达于淋巴管内皮细胞。其N端连接模块包含一个透明质酸结合域（HABD），该结构域形成一个深的带正电荷的沟槽，由三个二硫键（例如Cys84-Cys105）和β4/β5环上的Arg104和Lys107残基稳定，这些残基通过滑动机制夹住透明质酸（HA）链。该结构域两侧是高度糖基化的茎状结构，其上的N-和O-连接糖基化位点调节HABD的可及性。茎状结构之后是一个跨膜螺旋和一个短的胞质尾，胞质尾可通过Cys201和Cys204处的二硫键形成同源二聚体，从而协同结合配体。在静息单体状态下，唾液酸化的聚糖通过空间位阻掩盖了HABD；然而，诸如VEGF-C之类的炎症刺激会诱导神经氨酸酶介导的去唾液酸化，从而暴露结合槽，使固定化的HA聚合物的非还原末端能够对接。这些HA链通过水润滑的滑动相互作用依次穿过相邻的LYVE1受体，每个受体的脱离力约为40 pN。这种滑动相互作用支持可逆的白细胞触觉趋向性，并使树突状细胞能够利用其富含HA的糖萼在淋巴管表面滚动。同时，由于胞质尾较短，LYVE1对可溶性HA的内吞作用能够循环利用间质基质，从而维持体液平衡，而无需信号转导。这种机械敏感性黏附机制是免疫细胞向淋巴结迁移和淋巴管生成以及组织HA清除的基础。值得注意的是，LYVE1 在肿瘤相关淋巴管中上调，通过增强树突状细胞和肿瘤细胞的进入来促进转移，尤其是在与 VEGFR3 共表达时，而 LYVE1 介导的 HA 清除受损会导致淋巴水肿中的淋巴功能障碍。

背景

LYVE1（淋巴管内皮透明质酸受体1）是一种I型整合膜糖蛋白，是CD44的同源物，主要表达于淋巴管内皮细胞。其N端连接模块包含一个透明质酸结合域（HABD），该结构域形成一个深的带正电荷的沟槽，由三个二硫键（例如Cys84-Cys105）和β4/β5环上的Arg104和Lys107残基稳定，这些残基通过滑动机制夹住透明质酸（HA）链。该结构域两侧是高度糖基化的茎状结构，其上的N-和O-连接糖基化位点调节HABD的可及性。茎状结构之后是一个跨膜螺旋和一个短的胞质尾，胞质尾可通过Cys201和Cys204处的二硫键形成同源二聚体，从而协同结合配体。在静息单体状态下，唾液酸化的聚糖通过空间位阻掩盖了HABD；然而，诸如VEGF-C之类的炎症刺激会诱导神经氨酸酶介导的去唾液酸化，从而暴露结合槽，使固定化的HA聚合物的非还原末端能够对接。这些HA链通过水润滑的滑动相互作用依次穿过相邻的LYVE1受体，每个受体的脱离力约为40 pN。这种滑动相互作用支持可逆的白细胞触觉趋向性，并使树突状细胞能够利用其富含HA的糖萼在淋巴管表面滚动。同时，由于胞质尾较短，LYVE1对可溶性HA的内吞作用能够循环利用间质基质，从而维持体液平衡，而无需信号转导。这种机械敏感性黏附机制是免疫细胞向淋巴结迁移和淋巴管生成以及组织HA清除的基础。值得注意的是，LYVE1 在肿瘤相关淋巴管中上调，通过增强树突状细胞和肿瘤细胞的进入来促进转移，尤其是在与 VEGFR3 共表达时，而 LYVE1 介导的 HA 清除受损会导致淋巴水肿中的淋巴功能障碍。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/40113779/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26823460/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%