MAD2L2 Antibody [P22A23]
目录号: F5275
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: NCI-H1963, Lane 2: NCCIT
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
24 kDa
|
| 阳性对照 | NCI-H1963 cells; NCCIT cells; Calu cells; NMuMG cells; MBT2 cells; MTLn3 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| MAD2L2 Antibody [P22A23] 可检测内源性 MAD2L2 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 染色体，细胞质，细胞骨架，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9UI95 |
| 克隆号 |
|---|
| P22A23 |
| 别名 |
|---|
| Mitotic spindle assembly checkpoint protein MAD2B; MAD2-like protein 2; REV7; MAD2L2 |
| 背景 |
|---|
| 有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白2（MAD2L2，又名REV7）是一种多功能HORMA结构域蛋白，它通过参与纺锤体检查点机制和多种DNA修复通路，整合细胞周期调控和DNA损伤反应。MAD2L2属于MAD2样蛋白或HORMA家族，其独特的闭合蛤壳状结构使其能够作为衔接蛋白或支架蛋白发挥作用，通过界面转换模式与其他蛋白结合，而非构成纺锤体组装检查点的核心。MAD2L2作为DNA聚合酶ζ的核心亚基，连接催化亚基REV3和TLS支架蛋白REV1，协调跨损伤合成过程中的损伤旁路，并通过阻断DNA加合物来促进DNA复制。在双链断裂修复过程中，MAD2L2 与 REV1 和聚合酶 ζ 结合于停滞的复制叉处，参与修复合成步骤。同时，MAD2L2 也参与屏蔽蛋白复合物的形成，通过限制 5' 端切除来调控修复途径的选择，从而促进非同源末端连接而非同源重组。此外，MAD2L2 还通过与 CDH1 及相关检查点蛋白相互作用，抑制后期促进复合物/细胞周期蛋白体的过早激活，从而参与有丝分裂调控，延缓有丝分裂进程，并在复制压力下维持基因组完整性。与邻近正常组织相比，MAD2L2 在结直肠癌和其他实体恶性肿瘤中经常过表达，且高 mRNA 或蛋白水平与异常有丝分裂象数量增加、染色体不稳定以及总体生存率降低相关。这表明，MAD2L2 的高表达强化了易错 DNA 修复和检查点适应机制，从而促进肿瘤的进化。 |
| 参考文献 |
|---|
|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
