MTP Antibody [J4K3]
目录号: F4527
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Mouse liver, Lane 2: Rat liver
操作要点
WB
建议一抗稀释比: 1:100
建议一抗稀释比: 1:100
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 反应性 |
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| Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
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| Mouse Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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97 kDa
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| 阳性对照 | Mouse liver; Mouse small intestine; Rat liver |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:100），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| MTP Antibody [J4K3] 可检测内源性 MTP 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 内质网，高尔基体 |
| Uniprot ID |
|---|
| O08601 |
| 克隆号 |
|---|
| J4K3 |
| 别名 |
|---|
| Microsomal triglyceride transfer protein large subunit; MTTP; MTP |
| 背景 |
|---|
| 微粒体甘油三酯转移蛋白 (MTP) 与蛋白二硫键异构酶形成异二聚体，构成脂质转移机制，该机制对于肝细胞和肠细胞中载脂蛋白 B (apoB) 脂蛋白的组装至关重要。MTP 在回旋镖状支架内组织脂质结合口袋，该支架可容纳甘油三酯和胆固醇酯等中性脂质，以及磷脂和鞘脂等其他脂质，从而通过瞬时疏水通道的形成，实现供体膜和受体膜之间的大量脂质转移。MTP 通过其 N 端 100 个氨基酸残基与新翻译的 apoB 发生物理结合，催化一系列脂化步骤：首先，磷脂转移稳定 apoB 的折叠；随后，甘油三酯的加载将原始脂质口袋扩展成一个体积较大的核心，为极低密度脂蛋白 (VLDL)/乳糜微粒前体颗粒的形成做好准备，使其进入高尔基体成熟并最终分泌。胰岛素通过FoxO1磷酸化和核外排以及SREBP-1c介导的甾醇调节元件竞争来抑制MTP启动子活性；而LXR激动剂则通过DR4基序增强MTP表达，从而协调肝脏VLDL输出与膳食脂肪供应。胆固醇负荷通过直接结合阻断转运通道，变构抑制MTP活性，将甾醇感知与脂蛋白生成速率相偶联，并防止空腹-进食转换期间的细胞脂质毒性。MTP调控膳食甘油三酯的肠道乳糜微粒乳化以及肝脏VLDL输出，维持全身脂肪酸向外周组织的输送，其在吸收性肠细胞和门静脉周围肝细胞中的表达峰值反映了餐后需求。完全的 MTP 缺乏表现为无β脂蛋白血症，伴有脂肪吸收不良、棘红细胞增多症和维生素 E 缺乏引起的脊髓小脑变性，而部分功能障碍则通过损害 VLDL 介导的甘油三酯清除与 NAFLD 相关。 |
| 参考文献 |
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