OGDH Antibody [F21L21]
目录号: F9941
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: LNCap, Lane 2: Hela, Lane 3: DLD-1, Lane 4: MCF7
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
110 kDa
|
| 阳性对照 | LNCaP cells; HeLa cells; DLD-1 cells; MCF7 cells; mIMCD-3 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| OGDH Antibody [F21L21] 可检测内源性 OGDH 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 线粒体，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q02218 |
| 克隆号 |
|---|
| F21L21 |
| 别名 |
|---|
| 2-oxoglutarate dehydrogenase, mitochondrial; Alpha-ketoglutarate dehydrogenase; OGDH |
| 背景 |
|---|
| 在真核生物线粒体三羧酸循环中，OGDH是2-酮戊二酸脱氢酶多酶复合物的E1亚基。该复合物与二氢硫辛酰胺S-琥珀酰转移酶和二氢硫辛酰胺脱氢酶组装，将2-酮戊二酸脱羧生成琥珀酰辅酶A，同时释放CO₂并生成NADH。钙离子与OGDH上的特定位点结合，例如D114ADLD和E139SDLD等区域，从而降低2-酮戊二酸的Km值，增强其在生理浓度下的底物亲和力。ADP通过降低底物Km值激活该复合物，而ATP和NADH则通过提高Km值和改变NADH敏感性阈值发挥抑制作用。这些变构调节将OGDH活性与细胞能量状态、腺嘌呤核苷酸比例和氧化还原平衡整合起来，引导三羧酸循环流向氧化磷酸化或生物合成需求。该蛋白组装成立方体结构，其辅因子结合域在催化过程中相对于核心摆动，促进硫胺素焦磷酸依赖性脱羧、硫辛酰胺摆动进行酰基转移以及NADH生成。OGDH维持电子传递所需的NADH供应，同时调节相关黄素产生的活性氧。突变或抑制导致的失调会损害复合物的组装和通量，并通过线粒体功能障碍与脑病和神经退行性衰退相关。 |
| 参考文献 |
|---|
|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
