RARα Antibody [M12K22]
目录号: F4097
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: T47D, Lane 2: MCF7, Lane 3: HepG2
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP, ChIP |
| 反应性 |
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| Human, Mouse, Monkey |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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60 kDa
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| 阳性对照 | NB-4 cells; MV-4-11 cells; T-470 cells; 293T cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| RARα Antibody [M12K22] 可检测内源性 RARα 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
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| P10276 |
| 克隆号 |
|---|
| M12K22 |
| 别名 |
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| Retinoic acid receptor alpha; RAR-alpha; Nuclear receptor subfamily 1 group B member 1; RARA; NR1B1 |
| 背景 |
|---|
| RARα（视黄酸受体α）是核受体超家族的创始成员之一，与RARβ/γ和RXR亚型同属该家族。它主要作为RXR异二聚体转录因子发挥作用，感知全反式视黄酸（ATRA），从而调控对胚胎模式形成、造血和上皮分化至关重要的基因表达。其模块化结构包括一个DNA结合域（含有两个锌指，用于识别视黄酸反应元件（RARE））和一个配体结合域。在ATRA结合后，配体结合域会发生构象重排，将辅阻遏物（NCoR/HDAC）替换为辅激活物（SRC/p300）。在配体缺失的情况下，RARα-RXR通过HDAC介导的染色质压缩来沉默靶基因，例如HOX基因簇和Cdx1；而ATRA结合则诱导螺旋12重定位、CBP募集和H3K14乙酰化，从而激活转录，同时促进JNK对受体的磷酸化和蛋白酶体降解，最终终止信号传导。这种动态转换与Wnt/β-catenin拮抗作用相整合，其中RARα通过直接异二聚化抑制LEF/TCF靶基因和TGF-β/Smad通路，从而在发育过程中精细调控间质-上皮转化，并抑制角质形成细胞的异常增殖。 RARα 调控粒细胞生成、肢芽生长和皮肤屏障形成，使其成为研究人员在急性早幼粒细胞白血病 (APL) 患者来源的异种移植模型中模拟维甲酸药效学或在类器官培养中通过 ChIP-seq 分析鳞状细胞分化时的关键效应因子。急性早幼粒细胞白血病中的 t(15;17) PML-RARα 融合蛋白持续募集共抑制因子至 RARE，从而阻断分化，直至超生理剂量的 ATRA 解除抑制，揭示其治疗脆弱性。 |
| 参考文献 |
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