SET1A Antibody [K11A18]

目录号: F8550

抗体应用：反应性：Human

Lane 1: 293T, Lane 2: Hela

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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操作要点

WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
湿转参考条件：250 mA, 180 min。

使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:200 CHIP1:100

抗体应用
WB, IP, ChIP

反应性
Human

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
300 kDa

阳性对照	293T cells; HeLa cells
阴性对照

实验方法

WB
实验步骤：样品制备 1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液； 5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度； 6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。电泳分离 1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）转膜 1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中； 2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗； 3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表湿转法参考条件：250 mA, 180 min。（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）封闭 1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min； 2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温； 3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。抗体孵育 1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min； 3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h； 4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。显色 1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀； 2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

实验步骤：

样品制备

1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。

2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。

4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；

5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；

6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。

电泳分离

1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表

2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）

转膜

1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；

2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；

3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；

4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表

湿转法参考条件：250 mA, 180 min。

（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）

封闭

1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；

2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；

3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

抗体孵育

1. 用一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；

2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；

3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；

4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。

显色

1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；

2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
SET1A Antibody [K11A18] 可检测内源性 SET1A 总蛋白水平。

蛋白定位
染色体，细胞质，细胞核

Uniprot ID
O15047

克隆号
K11A18

别名
Histone-lysine N-methyltransferase SETD1A; Lysine N-methyltransferase 2F; SET domain-containing protein 1A (hSET1A); Set1/Ash2 histone methyltransferase complex subunit SET1; SETD1A; KIAA0339; KMT2F; SET1; SET1A

背景
SET1A，也称为SETD1A或KMT2F，是酵母Set1的哺乳动物同源物，是SET1A/COMPASS组蛋白H3赖氨酸4甲基转移酶复合物的催化亚基。该复合物对胚胎干细胞的自我更新、早期发育和分化至关重要。SET1A具有保守的C端SET结构域，该结构域对其甲基转移酶活性至关重要，主要负责H3K4的二甲基化和三甲基化。SET1A的C端结构域两侧是n-SET结构域和post-SET结构域，以及能够与核心亚基（如WDR5、RBBP5、ASH2L和DPY30）相互作用的区域，这些亚基统称为WRAD复合物，该复合物能够显著增强SET1A的活性。此外，SET1A还与一些独特的蛋白质相互作用，例如与CFP1结合以结合CpG岛，以及与WDR82连接以连接到RNA聚合酶II的C端结构域。 SET1A的主要功能是在活性或待激活基因的启动子区域沉积H3K4三甲基化，从而促进染色质开放状态和转录激活。值得注意的是，由于SET结构域不具备催化支架功能，因此它并非胚胎干细胞增殖或维持多能性标记物（如Nanog、Oct4和Sox2）所必需，但它对于正常的细胞分化至关重要，因为它能够驱动包括Bmp5、Epor、HoxA基因簇和双价位点在内的发育基因的H3K4三甲基化，从而支持中胚层分化、胚状体形成并防止多能性因子的异常持续存在。在发育过程中，SET1A与MLL2协同作用，进行阶段特异性的H3K4三甲基化转换，其中MLL2参与自我更新，SET1A参与分化，调控Hox基因表达，并以非酶促方式支持有丝分裂的保真性和DNA修复。 SET1A 的突变或缺失会导致胚胎在早期阶段死亡，由于 H3K4 三甲基化缺陷，与自闭症和精神分裂症等神经发育障碍有关，并且在癌症中过度表达可通过涉及 YAP、Wnt 和 HIF1 α 的通路增强增殖和侵袭。

背景

SET1A，也称为SETD1A或KMT2F，是酵母Set1的哺乳动物同源物，是SET1A/COMPASS组蛋白H3赖氨酸4甲基转移酶复合物的催化亚基。该复合物对胚胎干细胞的自我更新、早期发育和分化至关重要。SET1A具有保守的C端SET结构域，该结构域对其甲基转移酶活性至关重要，主要负责H3K4的二甲基化和三甲基化。SET1A的C端结构域两侧是n-SET结构域和post-SET结构域，以及能够与核心亚基（如WDR5、RBBP5、ASH2L和DPY30）相互作用的区域，这些亚基统称为WRAD复合物，该复合物能够显著增强SET1A的活性。此外，SET1A还与一些独特的蛋白质相互作用，例如与CFP1结合以结合CpG岛，以及与WDR82连接以连接到RNA聚合酶II的C端结构域。 SET1A的主要功能是在活性或待激活基因的启动子区域沉积H3K4三甲基化，从而促进染色质开放状态和转录激活。值得注意的是，由于SET结构域不具备催化支架功能，因此它并非胚胎干细胞增殖或维持多能性标记物（如Nanog、Oct4和Sox2）所必需，但它对于正常的细胞分化至关重要，因为它能够驱动包括Bmp5、Epor、HoxA基因簇和双价位点在内的发育基因的H3K4三甲基化，从而支持中胚层分化、胚状体形成并防止多能性因子的异常持续存在。在发育过程中，SET1A与MLL2协同作用，进行阶段特异性的H3K4三甲基化转换，其中MLL2参与自我更新，SET1A参与分化，调控Hox基因表达，并以非酶促方式支持有丝分裂的保真性和DNA修复。 SET1A 的突变或缺失会导致胚胎在早期阶段死亡，由于 H3K4 三甲基化缺陷，与自闭症和精神分裂症等神经发育障碍有关，并且在癌症中过度表达可通过涉及 YAP、Wnt 和 HIF1 α 的通路增强增殖和侵袭。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32795105/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34803610/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%