SGK3 Antibody [D18P23]
目录号: F6719
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: MCF7, Lane 2: COS-7, Lane 3: COLO 205
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
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| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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61 kDa
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| 阳性对照 | MCF7 cells; mIMCD-3 cells; COS7 cells; COLO 205 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| SGK3 Antibody [D18P23] 可检测内源性 SGK3 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 胞质囊泡，内体 |
| Uniprot ID |
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| Q96BR1 |
| 克隆号 |
|---|
| D18P23 |
| 别名 |
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| Serine/threonine-protein kinase Sgk3; Cytokine-independent survival kinase; Serum/glucocorticoid-regulated kinase 3; Serum/glucocorticoid-regulated kinase-like; SGK3; CISK; SGKL |
| 背景 |
|---|
| SGK3（血清和糖皮质激素诱导激酶3）是AGC激酶家族中SGK亚家族的成员，与Akt密切相关，在PI3K信号通路中作为替代效应分子发挥作用，尤其是在经典Akt激活受损的情况下。它具有一个phox同源（PX）结构域，该结构域能够特异性地结合内体上的磷脂酰肌醇-3-磷酸（PI3P），此外，它还具有一个可通过连续磷酸化激活的激酶结构域。生长因子如IGF1通过双重PI3K通路（包括I类和III类PI3K通路）激活SGK3：I类PI3K生成PI(3,4,5)P3，SHIP2将其转化为PI3P以募集PX结构域；同时，mTORC2磷酸化Ser422位的疏水基序，启动PDK1对T环Thr320位的磷酸化，诱导构象变化，从而激活SGK3的催化活性；此外，III类PI3K（hVps34）通过UV-RAG复合物直接生成PI3P，即使I类PI3K受到抑制，也能确保SGK3稳定定位于内体。激活的SGK3随后磷酸化下游靶点（如NDRG1），促进其通过FBXW7介导的降解，增强细胞迁移和非锚定依赖性生长，同时维持糖原合成酶激酶-3的抑制和FOXO3a的核外定位，从而促进细胞存活和增殖。该通路在PIK3CA突变型乳腺癌和肝癌中替代Akt发挥作用，通过INPP4B依赖的PI3P积累驱动肿瘤发生，并在生理上调节神经元离子转运、肾脏钠重吸收以及对压力的代谢适应。该通路的上调赋予PTEN低表达癌症治疗耐药性，而敲除则会损害卵泡发生和葡萄糖稳态。 |
| 参考文献 |
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