SHOC2 Antibody [H23M19]
目录号: F5330
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: T47D, Lane 2: HCT116, Lane 3: HT29, Lane 4: C6
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB |
| 反应性 |
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| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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64 kDa
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| 阳性对照 | 786-O cells; TK-10 cells; KM12 cells; LNCaP cells; T-47D cells; HCT 116 cells; HT-29 cells; A549 cells; NIH/3T3 cells; C6 cells; COS-7 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| SHOC2 Antibody [H23M19] 可检测内源性 SHOC2 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9UQ13 |
| 克隆号 |
|---|
| H23M19 |
| 别名 |
|---|
| Leucine-rich repeat protein SHOC-2; Ras-binding protein Sur-8 homolog; SHOC2 |
| 背景 |
|---|
| SHOC2 是一种富含亮氨酸重复序列 (LRR) 的支架蛋白，它正向调控 RAS-MAPK 信号通路，并与 PI3K/Akt 通路相互作用，作为一个模块化平台，协调特定信号复合物的组装和动态变化。SHOC2 折叠成一个凹陷的富含 LRR 的结构域，该结构域介导多种蛋白质-蛋白质相互作用，使其能够募集到活化的 RAS-GTP 和蛋白磷酸酶 1 (PP1) 的催化亚基上。同时，其 N 端区域参与竞争性膜结合和调控开关。SHOC2 与调控亚基 PP1 和 GTP 结合的小 GTP 酶 M-RAS 形成三元复合物，该复合物作为 RAF-MEK-ERK 信号通路的特异性加速器，促进 RAF 二聚化和 MEK/ERK 磷酸化，这些过程发生在受体酪氨酸激酶驱动的生长因子输入之后。 SHOC2 与 PI3K 的 p110α 催化亚基结合，从而将 RAS-MAPK 激活与 PI3K/Akt 刺激联系起来，并拓宽了依赖于 ERK 和 Akt 信号协同作用的下游转录和代谢输出范围。这种 ERK 和 PI3K/Akt 通路的双重激活是 SHOC2 在促进上皮细胞和癌细胞的细胞运动、细胞骨架重塑和侵袭行为中发挥作用的基础，其表达支持增强细胞迁移能力和转移潜能的过程。引入 N 端肉豆蔻酰化基序的 SHOC2 生殖系突变会导致该蛋白异常的组成型膜靶向，从而导致 RAF-ERK 信号持续增强，且这种增强不依赖于生长因子，并导致 Noonan 样综合征伴有生长期毛发松散的 RAS-MAPK 过度活跃表型。 |
| 参考文献 |
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