SMC2 Antibody [P11C8]
目录号: F7337
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Hela, Lane 2: COS, Lane 3: H-4-II-E
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 反应性 |
|---|
| Human, Rat, Monkey |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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140 kDa
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| 阳性对照 | HeLa cells; COS cells; H‑4‑II‑E cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| SMC2 Antibody [P11C8] 可检测内源性 SMC2 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 染色体，细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| O95347 |
| 克隆号 |
|---|
| P11C8 |
| 别名 |
|---|
| Structural maintenance of chromosomes protein 2; SMC protein 2; SMC-2; Chromosome-associated protein E; hCAP-E; SMC2; CAPE |
| 背景 |
|---|
| SMC2 与 SMC4 共同构成染色体结构维持蛋白家族中凝聚蛋白 I 和 II 复合物的核心 ATPase 亚基，促进染色体压缩，这对于有丝分裂的分离至关重要。该蛋白具有 N 端和 C 端核苷酸结合域，通过中央铰链区形成异二聚体，构成环绕染色质的环状结构，而卷曲螺旋片段则促进辅助亚基的结合。SMC2-SMC4 异二聚体与 II 型拓扑异构酶相互作用时，会在 DNA 中产生 ATP 依赖性的正超螺旋，从而驱动染色体从前期到后期的轴向缩短。辅助亚基 CAP-H/CAP-D/CAP-G（凝聚蛋白 I）或 CAP-H2/CAP-D3/CAP-G2（凝聚蛋白 II）则调节 DNA 结合亲和力和环挤出。在前中期，凝聚素II聚集于着丝粒，促进H3S10磷酸化和姐妹染色单体的分离；而凝聚素I则定位于染色体臂上，以维持有丝分裂的精确性。ATPase活性通过SMC2/SMC4界面处的ATP结合、头-头二聚化、铰链介导的DNA捕获以及沿染色质纤维的动力易位循环发挥作用。SMC2的缺失会导致有丝分裂染色体体积增大、着丝粒周围致密化破坏以及双极纺锤体附着受损，最终导致后期桥形成和胞质分裂失败。母源SMC2支持卵母细胞染色体凝聚和合子原核聚集，其敲除会导致发育停滞。在过度增殖状态下，β-catenin/TCF4转录上调SMC2的表达，以维持结直肠肿瘤细胞的快速有丝分裂周期。 |
| 参考文献 |
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