SMYD3 Antibody [P23D23]
目录号: F8492
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: HCT116, Lane 2: MCF7, Lane 3: Vero
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB |
| 反应性 |
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| Human, Monkey |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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42 kDa
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| 阳性对照 | HCT-15 cells; HCT 116 cells; MCF7 cells; Vero cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| SMYD3 Antibody [P23D23] 可检测内源性 SMYD3 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q9H7B4 |
| 克隆号 |
|---|
| P23D23 |
| 别名 |
|---|
| Histone-lysine N-methyltransferase SMYD3;SET and MYND domain-containing protein 3;Zinc finger MYND domain-containing protein 1;SMYD3;ZMYND1;ZNFN3A1 |
| 背景 |
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| SET和MYND结构域蛋白3 (SMYD3) 是一种SET结构域家族的赖氨酸甲基转移酶，它在细胞核和细胞质之间穿梭，并作为促癌基因的转录增强因子发挥作用。SMYD3通过其MYND结构域结合启动子和增强子处的染色质，并能甲基化组蛋白H3的第4位赖氨酸 (H3K4)、组蛋白H4的第5位赖氨酸 (H4K5) 以及可能还有组蛋白H4的第20位赖氨酸 (H4K20)。这些甲基化修饰既与转录激活相关，在某些情况下，也可通过募集核受体共抑制复合物等因子来抑制转录，具体取决于启动子结构和相互作用的蛋白。 SMYD3 可甲基化非组蛋白，例如血管内皮生长因子受体 1 (VEGFR1) 的赖氨酸 831 位点，从而增强其激酶活性和下游信号传导；它还可以甲基化 AKT1，促进其膜定位和磷酸化激活，从而将甲基转移酶活性与生长因子和代谢信号通路整合起来。SMYD3 在肝癌、乳腺癌、结直肠癌和其他癌中经常过表达，SMYD3 表达增强可促进癌细胞的增殖、黏附和迁移，而 SMYD3 的敲低或催化失活则可抑制肿瘤生长和肿瘤表型。SMYD3 以全长蛋白和缺失 N 端 34 个氨基酸的切割异构体两种形式存在，截短形式的 SMYD3 对组蛋白 H3 的甲基转移酶活性增强。 |
| 参考文献 |
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