UNC5B Antibody [H5N21]

目录号: F3976

抗体应用：反应性：Human

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例
IF1:200

抗体应用
IF

反应性
Human

抗体类型
Mouse Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

阳性对照	SHSY5Y cells
阴性对照

实验方法

IF
实验步骤：样品准备 1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。 2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。 3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。 4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。固定 1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。通透 1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。） 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。封闭添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。免疫荧光染色（第一天） 1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。 2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。免疫荧光染色（第二天） 1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。 3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。 5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。封片 1. 抗荧光淬灭封片剂封片。 2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。 3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

实验步骤：

样品准备

1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。

2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。

3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。

4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。

固定

1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

通透

1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。

（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

封闭

添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）

注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。

免疫荧光染色（第一天）

1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。

2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。

免疫荧光染色（第二天）

1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。

3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。

5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。

封片

1. 抗荧光淬灭封片剂封片。

2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。

3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
UNC5B Antibody [H5N21] 可检测内源性 UNC5B 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞膜，内膜系统

Uniprot ID
Q8IZJ1

克隆号
H5N21

别名
P53RDL1; UNC5H2; UNQ1883/PRO4326; UNC5B; Netrin receptor UNC5B; Protein unc-5 homolog 2; Protein unc-5 homolog B; p53-regulated receptor for death and life protein 1; P53rdl1

背景
UNC5B是UNC5家族的依赖性受体，参与轴突导向和血管发育过程中netrin-1介导的排斥作用。其特征在于两个胞外Ig样结构域（Ig1-2）和两个血小板反应蛋白1型重复序列（TSP1），后者介导netrin-1的结合，而硫酸乙酰肝素可进一步增强这一过程。UNC5B具有单个跨膜螺旋和一个胞质区，该胞质区包含ZU5、UPA和死亡结构域（DD）。在DD中，caspase-3在DLVD↓N（Asp931）处切割，释放促凋亡的胞内结构域（ICD）。UPA中的Phe601等残基可稳定其自身抑制的封闭构象。在缺乏netrin-1的情况下，UNC5B同源二聚体处于开放的胞质状态，其结构域（DD）在Ser308位点去磷酸化后募集DAPK1，激活该激酶并刺激p53/Bax/caspase-9依赖性细胞凋亡；同时，UNC5B-DCC异源二聚体暴露DCC的P1结构域，通过抑制Rac1/Cdc42和PAK/LIMK/cofilin介导的F-肌动蛋白突起崩解，导致排斥性信号传导，从而修剪过多的轴突或血管尖端细胞丝状伪足。netrin-1结合后，ZU5-UPA相互作用被稳定，阻断DAPK1的接近，并将信号传导转移至促血管生成的PI3K/Akt存活通路，同时继续进行排斥性细胞骨架调节。 UNC5B主要在内皮组织和神经组织中表达，其介导的修剪对于中枢和周围神经系统回路的精细化以及血管模式的形成至关重要。而剪接异构体UNC5B-Δ8（由NOVA2介导的第8外显子跳跃产生）则促进组成型、对netrin-1不敏感的细胞凋亡，以确保顶端细胞的竞争。UNC5B的表观遗传沉默或致癌突变在结直肠癌中常见，会破坏排斥和存活之间的平衡，从而促进肿瘤血管生成、转移和不良预后。

背景

UNC5B是UNC5家族的依赖性受体，参与轴突导向和血管发育过程中netrin-1介导的排斥作用。其特征在于两个胞外Ig样结构域（Ig1-2）和两个血小板反应蛋白1型重复序列（TSP1），后者介导netrin-1的结合，而硫酸乙酰肝素可进一步增强这一过程。UNC5B具有单个跨膜螺旋和一个胞质区，该胞质区包含ZU5、UPA和死亡结构域（DD）。在DD中，caspase-3在DLVD↓N（Asp931）处切割，释放促凋亡的胞内结构域（ICD）。UPA中的Phe601等残基可稳定其自身抑制的封闭构象。在缺乏netrin-1的情况下，UNC5B同源二聚体处于开放的胞质状态，其结构域（DD）在Ser308位点去磷酸化后募集DAPK1，激活该激酶并刺激p53/Bax/caspase-9依赖性细胞凋亡；同时，UNC5B-DCC异源二聚体暴露DCC的P1结构域，通过抑制Rac1/Cdc42和PAK/LIMK/cofilin介导的F-肌动蛋白突起崩解，导致排斥性信号传导，从而修剪过多的轴突或血管尖端细胞丝状伪足。netrin-1结合后，ZU5-UPA相互作用被稳定，阻断DAPK1的接近，并将信号传导转移至促血管生成的PI3K/Akt存活通路，同时继续进行排斥性细胞骨架调节。 UNC5B主要在内皮组织和神经组织中表达，其介导的修剪对于中枢和周围神经系统回路的精细化以及血管模式的形成至关重要。而剪接异构体UNC5B-Δ8（由NOVA2介导的第8外显子跳跃产生）则促进组成型、对netrin-1不敏感的细胞凋亡，以确保顶端细胞的竞争。UNC5B的表观遗传沉默或致癌突变在结直肠癌中常见，会破坏排斥和存活之间的平衡，从而促进肿瘤血管生成、转移和不良预后。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34381052/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30084000/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%