UQCRFS1/RISP Antibody [P24M17]
目录号: F6358
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Neuro-2a, Lane 2: HT55, Lane 3: REC-1
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
23 kDa
|
| 阳性对照 | HT55 cells; REC‑1 cells; HCC1806 cells; LOX‑IMVI cells; mIMCD‑3 cells; Neuro‑2a cells; NBT‑11 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| UQCRFS1/RISP Antibody [P24M17] 可检测内源性 UQCRFS1/RISP 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 内膜系统，线粒体，线粒体内膜 |
| Uniprot ID |
|---|
| P47985 |
| 克隆号 |
|---|
| P24M17 |
| 别名 |
|---|
| Cytochrome b-c1 complex subunit 5; Rieske iron-sulfur protein; RISP; UQCRFS1 |
| 背景 |
|---|
| UQCRFS1，又称里斯克铁硫蛋白或RISP，是线粒体复合物III（细胞色素bc1复合物）的可移动外在亚基，在电子传递链中发挥作用，促进氧化磷酸化过程中电子从泛醌到细胞色素c的转移。该蛋白包含一个由八个半胱氨酸和组氨酸残基配位的[2Fe-2S]簇，该簇位于一个折叠的外在结构域内，并通过一个跨膜螺旋与该结构域相连。这种构象变化使得该蛋白能够在细胞色素b的Qo和Qi位点之间进行摆动，从而执行Q循环，该循环在生理电位下每传递两个电子可转移四个质子，同时防止超氧化物泄漏。在催化过程中，Qo位点的还原型泛醇将第一个电子传递给高电位[2Fe-2S]簇，该簇通过组氨酸配位将电子传递给细胞色素c1；同时，半醌中间体将第二个电子分别传递给bL和bH血红素，从而维持链的连续性，并产生与ATP合成偶联的质子动力势。BCS1L分子伴侣将线粒体靶向序列切割的前体从线粒体基质导入，并通过LYRM7介导的Fe-S簇插入来稳定全酶形式，之后将其整合到靠近UQCRC1/UQCRC2核心亚基的膜上。在造血干细胞中，UQCRC1缺陷会通过SHP-1相互作用损害TGF-β信号的协调，从而破坏静止状态，导致细胞周期指数升高，并在连续移植过程中耗尽长期再生能力。 T 细胞受体刺激将 UQCRFS1 募集到脂筏中，复合物 III 的活性通过局部 ROS 和钙流放大 NFAT 和 NF-κB 的激活，敲除会减少 IL-2 的产生和增殖。 |
| 参考文献 |
|---|
|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
