YB1 Antibody [J2K10]
目录号: F4720
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: MEF, Lane 2: C2C12, Lane 3: H-4-II-E, Lane 4: COS-7
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
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| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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49 kDa
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| 阳性对照 | MCF7 cells; C2C12 cells; H-4-II-E cells; COS-7 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| YB1 Antibody [J2K10] 可检测内源性 YB1 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核，细胞外环境 |
| Uniprot ID |
|---|
| P67809 |
| 克隆号 |
|---|
| J2K10 |
| 别名 |
|---|
| Y-box-binding protein 1; YB-1; C factor I subunit A; EFI-A; Nuclease-sensitive element-binding protein 1; Y-box transcription factor; YBX1; NSEP1; YB1 |
| 背景 |
|---|
| YB-1（Y盒结合蛋白1）是进化上保守的冷休克结构域家族成员，该家族是一类多功能DNA和RNA结合蛋白，调控转录、RNA加工、翻译和mRNA稳定性。YB-1包含一个保守的冷休克结构域，该结构域介导其与单链DNA和RNA基序的结合，包括基因启动子中的经典Y盒序列（TAACC）；此外，YB-1还包含一个C端结构域，该结构域有助于核酸结合、寡聚化和亚细胞定位。YB-1作为一种转录因子，能够激活参与细胞增殖和治疗耐药性的基因，例如EGFR、c-ERBB2以及与耐药性相关的基因位点；同时，它还能抑制与细胞凋亡和肿瘤抑制相关的基因，包括p53通路和死亡受体信号传导的某些调控因子。 YB-1参与mRNP的形成，稳定特定mRNA（例如白细胞介素-2），并响应生长因子诱导的信号通路调节致癌转录本的翻译。YB-1的核转位受到细胞周期阶段和细胞外信号的严格调控，在G2/M期晚期以及高温、紫外线照射和生长因子刺激等应激条件下，YB-1会在细胞核内积累；这种穿梭受Ser102位点磷酸化、关键C端丝氨酸去磷酸化以及与核输入机制（例如转运蛋白-1）相互作用的调控。YB-1（尤其是其核定位形式）的过表达见于多种癌，包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌、头颈癌、鼻咽癌和胃肠道癌，且与肿瘤晚期、耐药性和预后不良相关。 |
| 参考文献 |
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