Home 一抗 Hexokinase II Rabbit mAb 仅限科研使用

Hexokinase II Rabbit mAb

目录号: F0228

    抗体应用： 反应性：
    • Lane 1: Hela
      Lane 2: COS-7
      Lane 3: RD
    规格 价格 库存 购买数量
    20uL 790 现货
    50uL 1240 现货
    100uL 1990 现货
    100uL*2 3790 现货

    400-668-6834

    info@selleck.cn

    客户使用该产品的实验数据

    操作要点

    WB
    建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
    建议曝光 60s 以上。

    使用信息

    稀释比例
    1:1000
    抗体应用
    WB
    反应性
    Human, Mouse, Rat, Monkey
    抗体类型
    Rabbit
    储存液配方
    PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN₃
    储存条件(自收到货起)
    -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
    预测分子量
    102 kDa
    阳性对照 HeLa; COS-7; RD
    阴性对照 A172

    实验方法

    WB
    实验步骤：
     
    样品制备
    1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。
    2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 将细胞转移至EP管中。用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声破碎，冰上静置裂解 30 min。冰上静置裂解 5 min。
    3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。
    4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
    5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
    6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
     
    电泳分离
    1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
    2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
     
    转膜
    1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
    2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
    3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好；
    4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表
    湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
    （注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
     
    封闭
    1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
    2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
    3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
     
    抗体孵育
    1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜；
    2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
    3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
    4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
     
    显色
    1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
    2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。(建议曝光时长 60s 以上)。
     

    Datasheet & SDS

    生物描述

    特异性

    Hexokinase II Rabbit mAb 检测内源性 Hexokinase II (HK2) 总的蛋白水平。在某些模型中，该抗体还会与 125 kDa 的非特异性蛋白质发生交叉反应。
    蛋白定位
    细胞质，内膜，线粒体，线粒体外膜
    Uniprot ID
    P52789
    克隆号
    J9L14
    别名
    Hexokinase II,HK2,HXK II
    背景

    己糖激酶 II (HK2) 是己糖激酶家族的关键成员，是一种催化葡萄糖磷酸化为葡萄糖-6-磷酸的酶，这是糖酵解的第一步。从结构上看，它是一种 100 kDa 蛋白质，具有 N 端和 C 端结构域，用于 ATP 结合、催化和与线粒体外膜上的线粒体蛋白（如 VDAC）相互作用，从而实现直接 ATP 访问和细胞凋亡抑制。HK2 在胰岛素敏感组织（如骨骼肌、心脏和脂肪组织）中高度表达，其表达受胰岛素、生长因子和葡萄糖水平调控。从功能上看，HK2 支持能量代谢，促进糖酵解，并有助于戊糖磷酸途径和糖原生成。重要的是，它可以防止葡萄糖从细胞中流出，通过与线粒体相互作用提高细胞存活率，并在应激条件下发挥保护作用，在癌细胞中表达升高并快速增殖。
    参考文献
    • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33946854/

    技术支持

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