Survivin (C6B16) Rabbit mAb

目录号: F2849

    抗体应用: 反应性:
    规格 价格 库存 购买数量
    20uL 790 现货
    50uL 1240 现货
    100uL 1990 现货
    100uL*2 3790 现货
     

    400-668-6834

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    操作要点

    <b>WB</b><br/>湿转参考条件:<span style='color:#FF0000;font-weight:bold;'>200 mA, 60 min</span>,建议使用<span style='color:#FF0000;font-weight:bold;‘='> 0.22 &mu;m </span>PVDF膜。<br />建议曝光 <span style='color:#FF0000;font-weight:bold;'>120s 以上</span>。 <br/>

    使用信息

    稀释比例
    1:5000-1:20000
    1:150
    1:1000
    1:100 - 1:250
    1:500
    抗体应用
    WB, IP, IHC, IF, FCM, ELISA
    反应性
    Human
    抗体类型
    Rabbit
    储存液配方
    PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3
    储存条件(自收到货起)
    -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years
    预测分子量
    16 kDa

    实验方法

    WB
    实验步骤:
     
    样品制备
    1. 组织样品:破碎组织,加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含蛋白酶抑制剂Cocktail),低温匀浆。
    2. 贴壁细胞样品:吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含蛋白酶抑制剂Cocktail),冰上静置裂解 5 min。
    3. 悬浮细胞样品:将培养基转移至离心管中离心,弃上清,用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer (含蛋白酶抑制剂Cocktail),冰上静置裂解 5 min。
    4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min,收集上清液;
    5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度;
    6. 加入蛋白上样缓冲液,将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min,冰上静置冷却后离心 5 min。
     
    电泳分离
    1. 根据所提蛋白的浓度,将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶(即下层胶)浓度:10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表
    2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V,观察 Marker,待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后,即可停止电泳。(注意电泳时电流切勿过大,如超过 150 mA 会导致温度上升,容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流,可对电泳槽使用冰浴降温。)
     
    转膜
    1.拿出电转槽,把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中;
    2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min,用转移缓冲液冲洗;
    3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好;
    4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。(推荐采用 0.22 µm PVDF 膜PVDF 膜孔径规格选择参照表
    湿转法参考条件:200 mA, 60 min
    (注意电转条件可根据蛋白大小适当调节,分子量大的蛋白适宜采用大电流,并延长转膜时间,但需要确保电转槽始终处于低温的环境中,避免凝胶融化。)
     
    封闭
    1. 电转移后,室温下用 TBST 洗膜 5 min;
    2. 在封闭液中将膜孵育 1 h,室温;
    3. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
     
    抗体孵育
    1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液(建议一抗稀释比 1:5000),4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜;
    2. 用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min;
    3. 在封闭液中加入二抗,室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h;
    4. 孵育结束后,用 TBST 洗膜 3 次,每次 5 min。
     
    显色
    1. 加入配制好的 ECL 发光底物(或根据二抗选择其他显色基质)混合均匀;
    2. 与膜孵育1 min,去除多余底物(需保持膜湿润),置于显影仪中进行曝光。 (建议曝光时长 120s 以上)
     

    Datasheet & SDS

    生物描述

    特异性

    Survivin (C6B16) Rabbit mAb可检测内源性 Survivin 总蛋白水平。

    别名
    API4, IAP4, BIRC5, Baculoviral IAP repeat-containing protein 5, Apoptosis inhibitor 4, Apoptosis inhibitor survivin
    克隆号
    C6B16
    背景

    Survivin(又称BIRC5,是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中最小的成员,具有单个N端杆状病毒IAP重复(BIR)结构域和C端卷曲螺旋区。这种进化保守蛋白同时调控细胞分裂和凋亡抑制,在胚胎发育和活跃增殖的成体细胞(尤其是癌细胞)中特异性表达,而在正常分化组织中几乎缺失。其以同源二聚体形式存在,与染色体乘客复合体(CPC)形成关键互作以维持有丝分裂功能。存活素通过磷酸化、乙酰化、泛素化等翻译后修饰调控稳定性与定位。尽管缺乏直接结合半胱天冬酶的能力,它仍能协同其他IAP(如XIAP、c-IAP1/2)及辅助蛋白(如HBXIP、XAF1)抑制凋亡并促进细胞存活。该蛋白在多种癌症中的过表达与不良预后、化疗耐药和肿瘤侵袭性相关,使其成为极具潜力的癌症诊疗靶点。

    参考文献

    技术支持

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