BDNF Antibody (Rabbit mAb) [A7P4]
目录号: F9030
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: 293T, Lane 2: 293T (BDNF(human) transfected)
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
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| Human, Mouse |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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28 kDa
28 kDa (ProBDNF), 12-14 kDa (Mature)
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| BDNF Antibody (Rabbit mAb) [A7P4] 可检测内源性 BDNF 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
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| 细胞外环境 |
| Uniprot ID |
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| P23560 |
| 克隆号 |
|---|
| A7P4 |
| 别名 |
|---|
| Abrineurin; ANON2; BDNF; BDNF precursor form; brain derived neurotrophic factor; Brain-derived neurotrophic factor; BULN2; MGC34632; neurotrophin; ProBDNF |
| 背景 |
|---|
| 脑源性神经营养因子（BDNF）是一种二聚体分泌型神经营养因子，属于NGF/NT-3/NT-4家族，它在发育和成年期调控神经元的生长、分化、存活和突触可塑性，并通过作用于下丘脑和边缘系统回路来调节能量平衡、行为和应激反应。前体proBDNF以pre-pro-蛋白的形式合成，经切割后生成proBDNF，并进一步加工成熟为mBDNF；proBDNF优先与p75神经营养因子受体（p75NTR）结合，通常与sortilin形成复合物，而mBDNF则与原肌球蛋白相关激酶B受体（TrkB）具有高亲和力结合，这些配体-受体配对导致截然相反的突触功能。 TrkB 激活需要 mBDNF 二聚化和受体二聚化，以及细胞内酪氨酸残基的跨自身磷酸化，从而募集 Shc、Shp2 和 PLCγ，启动三个主要级联反应：Ras–Raf–MEK–ERK 信号通路，支持神经元分化、神经突生长和活动依赖性基因表达；PI3K–Akt–mTOR 信号通路，促进存活、生长和蛋白质合成；以及 PLCγ–IP₃–DAG–PKC 信号通路，伴有 Ca²⁺ 动员，是突触强度快速调节的基础。这些通路汇聚于CREB和MEF2等转录因子以及局部翻译机制，使BDNF能够增加树突棘密度，调节AMPA和NMDA受体的转运，并稳定海马和皮层的长时程增强作用；而proBDNF-p75NTR信号通路则增强JNK激活，促进长时程抑制、树突棘回缩，并在某些情况下引发凋亡或修剪样反应，从而建立起一个双向控制系统，其中proBDNF和mBDNF的平衡塑造突触可塑性的极性。BDNF和TrkB广泛表达于中枢和周围神经系统，在海马、皮层、杏仁核、纹状体和下丘脑中含量较高；脑源性神经营养因子（BDNF）作为兴奋性和抑制性突触的神经递质调节剂，调控成年海马微环境中的神经发生，并支持多种神经元亚型（包括多巴胺能神经元、血清素能神经元和感觉神经元）的成熟和维持，同时还影响疼痛回路和应激轴的调节。BDNF的活动依赖性转录由NMDA受体和电压门控Ca²⁺通道介导的Ca²⁺内流、CaMK、ERK和CREB的激活以及启动子特异性调节因子（如CaRF）驱动，使得突触活动能够诱导BDNF表达，并将信号反馈至突触，从而构建突触-细胞核-突触信号环路，而该环路正是学习和记忆的基础。包括阿尔茨海默病、亨廷顿病、重度抑郁症、双相情感障碍、精神分裂症和焦虑症在内的多种神经系统和精神疾病中，循环和脑内脑源性神经营养因子（BDNF）水平会发生改变。BDNF Val66Met和其他多态性会影响活动依赖性分泌，并与认知和情感表型相关，这表明BDNF既是中枢神经系统疾病的机制因素，也是潜在的生物标志物。BDNF在参与摄食和奖赏的下丘脑和中脑边缘回路中的表达使其与体重调节和能量代谢相关。其中，BDNF-TrkB信号通路通过调节AMPK/ACC通路影响饱腹感、运动活性和脂肪氧化，这与其维持正常食欲和能量消耗的必要性相一致。 |
| 参考文献 |
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