c-Rel Antibody [B22C17]
目录号: F5039
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Raji, Lane 2: U973, Lane 3: A20, Lane 4: Neuro-2a
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB |
| 反应性 |
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| Human, Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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68-78 kDa
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| 阳性对照 | Rat thymus; CCRF‑CEM cells; Raji cells; NK‑92 cells; U‑937 cells; A20 cells; Neuro‑2a cells. |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/Nuclear Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| c-Rel Antibody [B22C17] 可检测内源性 c-Rel 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q04864 |
| 克隆号 |
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| B22C17 |
| 别名 |
|---|
| Proto-oncogene c-Rel; REL |
| 背景 |
|---|
| c-Rel属于Rel/NF-κB转录因子家族，其特征在于具有Rel同源结构域，该结构域介导DNA结合、二聚化和核定位。该蛋白包含一个N端Rel同源结构域，其中包含DNA结合和二聚化区域，以及RelA、c-Rel和RelB成员特有的C端转录激活结构域。在c-Rel表达占主导地位的静息造血细胞中，IκBα和IκBβ通过与Rel同源结构域内的核定位信号结合，将c-Rel二聚体隔离在细胞质中。促炎刺激触发IKK复合物磷酸化IκBα的N端丝氨酸残基，导致其发生K48连接的泛素化和蛋白酶体降解，从而暴露c-Rel核定位信号，使其以p50/c-Rel或RelA/c-Rel异二聚体的形式转位至细胞核。这些二聚体通过Rel同源结构域的DNA结合区与编码细胞因子、抗凋亡因子和细胞周期调节因子的靶基因启动子中的κB位点结合。IκBα的不同结构域通过N端和中央锚蛋白重复序列介导其胞质滞留，这些重复序列掩盖了核定位信号；而中央锚蛋白和C端酸性残基则通过竞争DNA结合位点或辅阻遏物来抑制其核转位。在未受刺激状态下，c-Rel 与 IκBβ 形成稳定的 p65/c-Rel 异二聚体。此时，过度磷酸化的 IκBβ 发挥抑制作用，直至受到刺激后发生缓慢磷酸化，触发其部分降解，从而选择性地释放 p65/c-Rel，激活 TNFα 启动子。核内 IκBα 与组成型核内 c-Rel 变体共定位，抑制转录激活。在 T 细胞分化过程中，c-Rel 诱导 RORγt 和 IL-21 的表达，这对于 Th17 和 Tfh 谱系至关重要，同时支持调节性 T 细胞中的 Foxp3 表达。c-Rel 活性升高可通过持续的靶基因表达驱动淋巴系统恶性肿瘤和慢性炎症。 |
| 参考文献 |
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