Casein Kinase 1α Antibody (Rabbit mAb) [B16K10]
目录号: F5207
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Mouse brain, Lane 2: Mouse kidney, Lane 3: Mouse spleen, Lane 4: Rat brain
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
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| Mouse, Rat, Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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39 kDa
36 kDa
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | Human fetal brain tissue; Human fetal kidney tissue; Human fetal spleen tissue; Human skin tissue; Mouse skin tissue; Rat skin tissue; Mouse brain tissue; Rat spleen tissue; HEK-293T cells; HeLa cells; MCF7 cells; NIH/3T3 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| Casein Kinase 1α Antibody (Rabbit mAb) [B16K10] 可检测内源性 Casein Kinase 1α 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞突起，着丝粒，染色体，细胞质，细胞骨架，动粒，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| P48729 |
| 克隆号 |
|---|
| B16K10 |
| 别名 |
|---|
| Casein kinase I isoform alpha, CKI-alpha, CK1, CSNK1A1 |
| 背景 |
|---|
| 酪蛋白激酶1α (CK1α) 是一种广泛表达的丝氨酸/苏氨酸激酶，属于CK1家族，它优先磷酸化酸性或预磷酸化的底物，并作为多种信号通路的核心调控因子，包括Wnt/β-catenin、昼夜节律、mTOR和炎症小体网络。该激酶包含一个保守的催化结构域，其N端结构域结合ATP，C端结构域结合底物，两侧是短的调控区，这些调控区影响亚细胞定位以及与细胞膜、细胞骨架和着丝粒支架蛋白的相互作用。在Wnt信号通路中，CK1α磷酸化β-catenin N端降解子内的Ser45位点，使其更容易被GSK3β磷酸化，并被β-TrCP E3连接酶识别，从而促进β-catenin的泛素化和蛋白酶体降解，并作为发育和Wnt驱动的癌症中经典Wnt信号通路的已知负调控因子发挥作用。CK1α还磷酸化生物钟的组成成分，例如PER1和PER2，调节它们的稳定性和核定位，并参与调控生物节律控制的转录振荡的时序。在营养感知中，CK1α作为mTORC1和mTORC2的正向调节因子发挥作用：它磷酸化mTOR抑制剂DEPTOR，使其泛素化降解，从而解除对mTOR复合物的抑制，并增强下游信号通路至S6K和Akt，以响应氨基酸和生长因子，从而将CK1α整合到细胞生长、代谢和存活的调控中。在固有免疫中，CK1α磷酸化NLRP3的特定丝氨酸残基，这种修饰抑制NLRP3炎症小体的组装，减少caspase-1的激活和IL-1β的产生，使CK1α成为细胞焦亡和炎症反应的抑制因子；增强CK1α对NLRP3磷酸化的小分子调节剂可以抑制炎症小体驱动的病理过程。 CK1α 还参与染色体分离和细胞骨架调控：它定位于着丝粒和纺锤体结构，并参与调控有丝分裂过程中着丝粒与微管的连接；在表皮细胞中，CK1α 介导的角蛋白细胞骨架解体促进细胞迁移和伤口愈合，将其激酶活性与细胞分裂和运动联系起来。CK1α 的缺失或抑制可稳定 β-catenin，并促进 Wnt 依赖性肿瘤的生长；而 CK1α 过度激活则可能增强代谢性疾病中的 mTOR 信号通路；相反，目前正在探索通过药物激活 CK1α 来抑制 NLRP3 炎症小体活性，并作为一种通过增强 β-catenin 的周转来靶向治疗 Wnt 驱动型癌症（如结直肠癌和前列腺癌）的策略。 |
| 参考文献 |
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