CCL3/MIP-1α Antibody (Rabbit mAb) [C14E20]
目录号: F9739
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: THP-1, Lane 2: THP-1 (PMA, LPS, Brefeldin A treated)
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：20%。
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：20%。
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 反应性 |
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| Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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10 kDa
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| 阳性对照 | NK-92 cells; U266B1 cells |
|---|---|
| 阴性对照 | HeLa cells; HT-29 cells; MCF7 cells; NCI-H929 ccells |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：20 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| CCL3/MIP-1α Antibody (Rabbit mAb) [C14E20] 可检测内源性 CCL3/MIP-1α 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞外环境 |
| Uniprot ID |
|---|
| P10147 |
| 克隆号 |
|---|
| C14E20 |
| 别名 |
|---|
| C-C motif chemokine 3, C-C motif chemokine ligand 3, CCL3, G0/G1 switch regulatory protein 19-1, G0S19-1, LD78-alpha(4-69), LD78ALPHA, MIP-1-alpha, MIP-1-alpha(4-69), MIP1A, PAT 464.1, SCYA3, SIS-beta |
| 背景 |
|---|
| CCL3，又称巨噬细胞炎症蛋白-1α (MIP-1α)，是一种由活化的巨噬细胞、单核细胞、T细胞、NK细胞和其他白细胞产生的CC趋化因子。它通过与靶细胞上的趋化因子受体CCR1和CCR5的高亲和力相互作用，发挥着强大的炎症细胞募集、造血调节和组织重塑的介质作用。成熟的分泌型趋化因子具有典型的CC趋化因子折叠结构，其N端区域包含受体激活所需的CC基序，而富含碱性残基的表面则有利于与糖胺聚糖结合，从而使CCL3在内皮细胞和基质细胞表面富集，并建立触觉梯度，引导白细胞趋化。 CCL3 与 CCR1 或 CCR5 结合后，激活 Gi 偶联信号通路，导致腺苷酸环化酶抑制、细胞内 Ca²⁺ 动员以及下游 ERK1/2、JNK 和 p38 MAPK 通路激活。这些通路驱动整合素激活、细胞骨架重组和肌动蛋白聚合，从而促进细胞牢固黏附并定向迁移穿过内皮细胞到达炎症灶。这些信号事件还会诱导其他促炎介质（包括 TNF-α 和 IL-6）的转录和分泌，并可上调 CCR1 和 CCR5 自身的表达，形成正反馈环路，放大局部炎症反应，并维持单核细胞、中性粒细胞、T 细胞和 NK 细胞在炎症组织内的聚集和活化。在造血层面，CCL3直接作用于造血干细胞和祖细胞，抑制干细胞增殖，同时允许或促进更成熟的祖细胞亚群增殖。这一特性使其成为干细胞抑制剂，并将CCL3信号通路与骨髓中干细胞静止状态和微环境稳态的调控联系起来。在血液系统恶性肿瘤，特别是急性和慢性白血病以及多发性骨髓瘤中，骨髓微环境中CCL3表达升高与疾病负荷相关，并通过维持炎症环境、调节干细胞/祖细胞动态以及调控破骨细胞分化和活性，促进白血病发生，进而促进骨吸收并支持肿瘤细胞生长。在骨骼中，CCL3通过CCR1/CCR5依赖性通路驱动破骨细胞生成，同时通过ERK介导的骨生成转录因子（如osterix）的下调抑制成骨细胞功能，导致骨钙素生成减少、矿化受损以及骨吸收与骨形成脱钩，这种机制是骨髓瘤诱导的溶骨性疾病的潜在机制。该趋化因子还参与神经免疫调节，中枢神经系统中CCL3水平升高会损害突触传递和海马可塑性，并改变记忆功能，这反映了其对神经元和胶质细胞信号传导的直接影响，以及其在白细胞募集方面的经典作用。 |
| 参考文献 |
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