Cleaved IL-1β (Asp117) Antibody (Rabbit mAb) [F15J4]
目录号: F0836
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Mouse bone marrow derived macrophages, Lane 2: Mouse bone marrow derived macrophages (LPS, 50 ng/ml, 4 h; nigericin, 15 μM, 45 min)
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 反应性 |
|---|
| Mouse |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
31 kDa
|
| 阳性对照 | mBMDM cells (LPS, 50 ng/ml, 4 h; nigericin, 15 μM, 45 min) |
|---|---|
| 阴性对照 | mBMDM cells |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| Cleaved IL-1β (Asp117) Antibody (Rabbit mAb) [F15J4] 可检测内源性 Cleaved IL-1β (Asp117) 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，溶酶体，细胞外环境 |
| Uniprot ID |
|---|
| P01584 |
| 克隆号 |
|---|
| F15J4 |
| 别名 |
|---|
| IL-; IL-1 beta; Il-1b; IL-1beta; Il1b; interleukin 1 beta; Interleukin-1 beta; OTTMUSP00000016525 |
| 背景 |
|---|
| 裂解的 IL-1β (Asp117) 是指由胞质前体 pro-IL-1β 在 Asp116 和 Ala117 之间的 caspase-1 识别基序处进行位点特异性蛋白水解而产生的成熟的、具有生物活性的白细胞介素-1β，这一步骤将无活性的无前导细胞因子转化为先天免疫信号的分泌介质。前体IL-1β是由“启动”信号（例如Toll样受体配体）诱导产生的，这些信号激活NF-κB并驱动IL1B转录，酶原一直局限于胞质溶胶中，直到炎症小体激活使前体caspase-1与ASC和NLR家族受体等衔接蛋白接近，导致caspase-1自身蛋白水解，组装成活性异二聚体酶，并在Asp116-Ala117处切割前体IL-1β，生成C端片段，从而暴露成熟的受体结合表面。 Asp117末端的IL-1β与辅助蛋白IL-1RAcP结合，激活IL-1受体I型，启动MyD88、IRAK激酶和TRAF6的募集，并通过NF-κB和MAPK级联反应传递信号，进而驱动其他炎症介质、黏附分子和趋化因子的转录，从而增强白细胞募集和效应功能。Asp117的成熟也赋予IL-1β非常规分泌途径的能力，因为caspase-1的活性不仅能加工IL-1β，还能切割gasdermin D形成膜孔，支持细胞焦亡期间的快速释放。此外，对IL-1β转运的生化分析表明，切割后的细胞因子通过多碱性基序聚集在富含PIP2的质膜皱褶处，并在成熟步骤完成后，通过不依赖于caspase-1和gasdermin D的途径缓慢释放。因此，经加工的Asp117形式是经典炎症小体通路激活的直接生化指标，并被广泛用作巨噬细胞、单核细胞和其他暴露于微生物产物、无菌危险信号或代谢应激的髓系细胞中caspase-1激活的替代标志物。在组织水平上，成熟IL-1β的积累会导致慢性炎症环境（例如癌症），在癌症中，肿瘤相关的免疫细胞和基质细胞在依次启动和炎症小体激活后产生并释放裂解的细胞因子；IL-1β随后通过促进血管生成、基质重塑和髓系细胞募集来塑造肿瘤微环境，从而将Asp117末端IL-1β的存在与促肿瘤炎症通路联系起来。炎症小体成分、caspase-1 或 IL-1β 信号传导的基因或药理学破坏会减少 Asp117 物种的生成或作用，并改变感染、纤维化和肿瘤生长模型中的疾病表型。 |
| 参考文献 |
|---|
|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
