FABP4 Antibody [H23L13]
目录号: F7853
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Mouse brown adipose, Lane 2: Rat brown adipose
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：20%。
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：20%。
湿转参考条件：200 mA, 60 min，建议使用 0.22 μm PVDF膜。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
|---|
| WB |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
|---|
| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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15 kDa
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| 阳性对照 | Mouse brown adipose tissue; Rat brown adipose tissue; RT-4 cells |
|---|---|
| 阴性对照 | U-2 OS cells |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：20 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.22 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| FABP4 Antibody [H23L13] 可检测内源性 FABP4 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| P15090 |
| 克隆号 |
|---|
| H23L13 |
| 别名 |
|---|
| Fatty acid-binding protein, adipocyte;Adipocyte lipid-binding protein (ALBP);Adipocyte-type fatty acid-binding protein (A-FABP; AFABP);Fatty acid-binding protein 4;FABP4 |
| 背景 |
|---|
| 脂肪酸结合蛋白4 (FABP4)，又称脂肪细胞脂肪酸结合蛋白 (A-FABP 或 aP2)，是FABP家族中的一种小型胞质脂质伴侣蛋白，主要表达于脂肪细胞和巨噬细胞，是长链脂肪酸和其他疏水配体的主要细胞内载体。该蛋白能高亲和力地结合脂肪酸，在细胞膜和酶之间转运脂肪酸，并调节脂质的可用性，从而参与代谢、信号传导和炎症通路，包括脂肪分解驱动的释放、β-氧化和类花生酸的生成。FABP4影响PPARγ活性和脂肪生成基因程序，在巨噬细胞中，它参与脂质代谢和促炎激活，从而将脂质转运与代谢调控和低度炎症（“代谢炎症”）联系起来。缺乏FABP4的小鼠模型在高脂饮食下表现出肥胖增加，但仍能免受胰岛素抵抗和糖尿病的侵害。此外，FABP4缺陷小鼠与ApoE基因敲除小鼠杂交后，动脉粥样硬化程度降低，表明FABP4将肥胖与胰岛素抵抗和血管疾病联系起来。FABP4启动子低表达变异与2型糖尿病和冠心病风险降低相关，循环FABP4水平与胰岛素抵抗、代谢综合征和心血管事件相关，可作为系统性生物标志物和效应因子发挥作用。 |
| 参考文献 |
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