Fascin Antibody [K2B22]
目录号: F7924
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: ACHN, Lane 2: Hela, Lane 3: HepG2, Lane 4: BT-549
使用信息
| 稀释比例 |
|---|
|
| 抗体应用 |
|---|
| WB, IP |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 抗体类型 |
|---|
| Mouse Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
|---|
| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
|
预测分子量
|
|---|
|
54 kDa
|
| 阳性对照 | HeLa cells; ACHN cells; Hep G2 cells; Colo320 cells; BT‑549 cells |
|---|---|
| 阴性对照 | HT‑29 cells |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
|
生物描述
| 特异性 |
|---|
| Fascin Antibody [K2B22] 可检测内源性 Fascin 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞连接，细胞突起，细胞质，细胞骨架 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q16658 |
| 克隆号 |
|---|
| K2B22 |
| 别名 |
|---|
| Fascin; Singed-like protein; FSCN1 |
| 背景 |
|---|
| 肌动蛋白聚糖蛋白（Fascin）是丝状伪足肌动蛋白交联家族中的主要肌动蛋白束蛋白，对于将平行肌动蛋白丝组织成紧密的束状结构至关重要，这些束状结构驱动细胞突起（如丝状伪足和片状伪足）的延伸。其单体球状结构包含四个β-三叶折叠，具有两个保守的肌动蛋白结合位点：一个位于N端β-三叶结构域1，其Ser39易受蛋白激酶C磷酸化；另一个位于β-三叶结构域3。这两个位点能够与F-肌动蛋白进行高亲和力、电荷中和的相互作用，促进肌动蛋白丝以一个Fascin分子与一个肌动蛋白二聚体结合的化学计量比横向聚集，同时保持束状结构的柔韧性，以支持动态突起的生长。Ser39的磷酸化会破坏第一个结合位点，降低肌动蛋白束的形成效率和丝状伪足的形成；而去磷酸化的Fascin则能稳定肌动蛋白束，促进细胞迁移过程中力的产生。 Fascin在体外和体内均能与β-catenin的armadillo重复结构域结合，并与β-catenin和钙黏蛋白共定位于细胞前缘，从而增强细胞黏附的周转。Fascin通过黏着斑激酶（FAK）依赖性途径激活Wnt/β-catenin信号通路。FAK抑制剂可阻断Fascin诱导的核内β-catenin积累以及下游靶基因（如c-Myc和cyclin D1）的表达。该通路通过上调波形蛋白（vimentin）和N-钙黏蛋白（N-cadherin）的表达并抑制E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达来维持上皮-间质转化（EMT），从而增强肿瘤球中的细胞集体迁移和干细胞样特性。Fascin在正常上皮细胞中低表达，在迁移性神经元、树突状细胞和血管平滑肌细胞中定位于细胞质束，但可通过EGFR-MAPK/ERK信号通路增强的Sp1启动子结合而上调。在乳腺癌、结直肠癌、食管鳞状细胞癌、前列腺癌和卵巢癌中，过度表达与淋巴结转移、晚期分期和不良预后相关，在某些情况下，它驱动侵袭，而与其束状作用无关。 |
| 参考文献 |
|---|
|
技术支持
在订购、运输、储存和使用我们的产品的任何阶段，您遇到的任何问题，均可以通过拨打我们的热线电话400-668-6834，或者技术支持邮箱tech@selleck.cn，直接联系到我们。我们会在24小时内尽快联系您。
* 必填项
