Fast Myosin Skeletal Heavy chain Antibody (Mouse mAb) [A10L9]
目录号: F1604
抗体应用：
反应性：
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| IHC, IF |
| 反应性 |
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| Rabbit |
| 抗体类型 |
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| Mouse Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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223 kDa
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| 阳性对照 | Rabbit tongue; ioSkeletal Myocytes |
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| 阴性对照 |
实验方法
| IF |
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实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
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| IHC |
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实验步骤：
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
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| Fast Myosin Skeletal Heavy chain Antibody (Mouse mAb) [A10L9] 可检测内源性 Fast Myosin Skeletal Heavy chain 总蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P12882 |
| 克隆号 |
|---|
| A10L9 |
| 别名 |
|---|
| MYH1_HUMAN, MyHC-2x, MyHC-IIx/d, Myosin heavy chain, Myosin heavy chain 1, Myosin heavy chain 2x, Myosin heavy chain IIx/d, Myosin-1, adult 1 |
| 背景 |
|---|
| 快速肌球蛋白骨骼肌重链是指构成成人II型骨骼肌纤维的主要快肌肌球蛋白重链（MyHC）亚型，它们通过决定粗肌丝的组成和横桥循环特性，定义了这些肌纤维的快速收缩动力学、高缩短速度和糖酵解代谢特征。快速MyHC蛋白具有典型的II型肌球蛋白结构，其N端为球状运动结构域，该结构域结合并水解ATP，并与肌动蛋白相互作用；其后是颈部区域，该区域与必需和调节性轻链结合；以及驱动二聚化和肌丝组装的长螺旋卷曲尾部。运动结构域和转换结构域内亚型特异性的序列差异调节ATPase活性、占空比和肌动蛋白滑动速度。快速骨骼肌肌球蛋白重链（MyHC）亚型，例如MyHC-IIX和MyHC-IIA，在短时间内产生高收缩力且依赖糖酵解代谢的肌纤维中富集。这些亚型与不同的肌球蛋白轻链和调节蛋白组合，产生纤维类型特异性的机械输出，以适应快速、节律性运动和高强度爆发性活动。在出生后肌肉成熟过程中，胚胎和新生儿MyHC亚型逐渐被次级肌纤维中的成体快速MyHC所取代。不同快速MyHC亚型的相对丰度受运动神经元放电模式、钙依赖性信号传导以及活动调节的转录程序控制，这些程序根据功能需求调整肌肉性能。 MyHC基因座的调控元件包括一个快速MyHC超级增强子。该超级增强子通过单核ATAC-seq技术鉴定，它是一个大的开放染色质区域，能够与多个快速MyHC启动子发生物理相互作用，并作为中心调控枢纽，协调该基因座上快速MyHC基因的高水平、纤维类型特异性转录。扰乱该超级增强子会降低几种快速MyHC亚型的表达，使纤维向慢速收缩表型转变，并改变力-速度特性，表明快速MyHC基因座的增强子结构是决定纤维类型和肌肉功能特化的关键因素。快速骨骼肌MyHC的表达模式被广泛用作分子和免疫组织化学标记，用于对肌肉纤维类型进行分类，评估训练、卸载或神经肌肉疾病引起的肌肉可塑性，以及评估肌病和运动神经元疾病中的选择性纤维萎缩或转化。 |
| 参考文献 |
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