FKBP5 Antibody (Rabbit mAb) [J11H16]
目录号: F4710
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: HT1080, Lane 2: Hela
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
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| Human, Mouse, Rat, Monkey |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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51 kDa
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| 阳性对照 | HT-1080 cells; HeLa cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| FKBP5 Antibody (Rabbit mAb) [J11H16] 可检测内源性 FKBP5 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，细胞核 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q13451 |
| 克隆号 |
|---|
| J11H16 |
| 别名 |
|---|
| 51 kDa FK506-binding protein, 51 kDa FK506-binding protein 5, 51 kDa FKBP, FKBP prolyl isomerase 5, FKBP-5, FKBP-51, FKBP5, FKBP51, FKBP54, HSP90-binding immunophilin, MGC111006, p54, PPIase, PPIase FKBP5, Ptg-10, Rotamase, T-cell FK506-binding protein |
| 背景 |
|---|
| FKBP5，又称FKBP51，是一种免疫亲和素家族成员，具有肽基脯氨酰异构酶活性和辅助伴侣蛋白功能，可在内分泌和炎症控制的交界处调节类固醇激素受体信号传导、应激轴调控和激酶通路。该蛋白包含一个N端FK1结构域，具有顺反式脯氨酰异构酶活性和FK506/雷帕霉素结合活性；一个主要发挥支架功能的FK2样结构域；以及一个C端区域，该区域含有四肽重复序列基序，介导与HSP90的结合，并与糖皮质激素、孕激素、雄激素和盐皮质激素受体组装成多伴侣蛋白复合物。FKBP5与HSP90结合的糖皮质激素受体（GR）复合物结合，降低配体亲和力和GR核转位效率，导致受体对激素的敏感性降低。糖皮质激素受体（GR）激活后，通过内含子糖皮质激素反应元件诱导FKBP5转录，从而在GR信号传导和下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴反馈上形成一个超短的负反馈环路。该自调节回路影响全身皮质醇动态，因为GR激活后FKBP5上调更强的等位基因与GR抵抗性增强、反馈抑制减弱以及人类应激激素水平持续升高相关。FKBP5还作为激酶信号传导的支架蛋白：它通过其FK1结构域与AKT结合，并通过TPR基序与磷酸酶PHLPP结合，促进二者相互作用，并促进AKT在Ser473位点的去磷酸化，从而限制AKT活性，并将FKBP5的丰度与PI3K-Akt通路输出和细胞存活信号传导联系起来。在炎症和心血管调控层面，FKBP5的表达受衰老和慢性应激的表观遗传和转录调控上调，增强NF-κB相关信号通路，并与促炎状态和心血管风险增加相关，表明FKBP5将应激内分泌机制与先天免疫激活和血管病理联系起来。FKBP5基因座的遗传和表观遗传变异，包括功能性多态性和应激反应性DNA甲基化改变，与FKBP5诱导性改变、下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA轴）反应性改变以及对重度抑郁症、创伤后应激障碍、双相情感障碍和相关应激诱发精神疾病的易感性相关，这些变异还会影响抗抑郁治疗的反应率。 |
| 参考文献 |
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