IFN-γ Antibody [A12D6]

目录号: F6371

抗体应用：反应性：Mouse

Lane 1: 293T (mock transfected), Lane 2: 293T (mIFN-γ transfected)

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
WB1:1000

抗体应用
WB

反应性
Mouse

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
18 kDa 17 kDa, 19 kDa, 23 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
IFN-γ Antibody [A12D6] 可检测内源性 IFN-γ 总蛋白水平。

克隆号
A12D6

别名
gamma interferon; Ifg; IFN-g; IFN-gamma; Ifng; Interferon gamma; interferon, gamma

背景
干扰素-γ (IFN-γ) 是唯一的 II 型干扰素，它是一种多效性细胞因子，通过作用于除成熟红细胞以外的几乎所有细胞类型，协调先天性和适应性免疫反应。IFN-γ 以非共价连接的同源二聚体形式存在，由两条反平行排列的多肽链组成，每条多肽链包含六个 α 螺旋，形成具有二重对称性的紧密球状结构。其生物活性需要氨基末端残基 1-10 和羧基末端残基 129-143 才能完全结合受体。该蛋白发生 N-糖基化修饰，形成成熟的亚基，在 SDS-PAGE 电泳中迁移至约 25 kDa 处。然而，糖基化修饰的作用是保护蛋白免受蛋白水解酶的攻击，而非直接发挥功能活性。 IFN-γ 的产生主要局限于 T 淋巴细胞（Th1 CD4+ 和细胞毒性 CD8+）和自然杀伤细胞，NK 细胞保持组成型 IFNG 位点可及性，能够在感染或癌症期间通过受体介导的激活快速分泌 IFN-γ。这种激活是通过免疫受体酪氨酸激活基序触发 Src/MAPK/ERK/p38 通路，激活 Fos 和 Jun 转录因子；此外，细胞因子介导的激活主要通过 IL-12 与 IL-12 受体结合，激活 STAT4 和 NF-κB，建立有利于 Th1 反应的正反馈回路。该蛋白结合由IFNGR1（90 kDa，主要配体结合剂）和IFNGR2（62 kDa，亲和力增强剂）组成的异二聚体受体复合物。化学计量比表明，每个IFN-γ同源二聚体结合两个IFNGR1亚基和两个IFNGR2亚基，形成一个2:2:2的信号传导活性复合物。IFNGR1在膜近端LPKS基序处具有组成型JAK1结合位点，其中Pro267对功能至关重要；此外，在YDKPH基序处还有一个可诱导的STAT1对接位点，Tyr440的磷酸化可启动STAT1 SH2结构域的募集。IFNGR2在PPSIPLQIEEYL序列处具有组成型JAK2结合位点。 IFN-γ 配体结合诱导 IFNGR1-IFNGR2 异二聚化，使组成型受体结合但处于非活性状态的 JAK1 和 JAK2 彼此靠近，从而实现自身磷酸化和反式磷酸化，激活这两个激酶。激活的 JAK 磷酸化 IFNGR1 的 Tyr440 位点，形成 STAT1 的结合位点。募集的 STAT1 在此位点经历 JAK 介导的 Tyr701 位点磷酸化以及丝氨酸激酶介导的 Ser727 位点磷酸化，最终被完全激活。磷酸化的 STAT1 分子通过 SH2 结构域与磷酸酪氨酸的相互作用形成同二聚体，从受体解离，转位至细胞核，并与具有 TTNCNNNAA 共有序列的 γ 激活位点 (GAS) DNA 元件结合，驱动干扰素刺激基因的转录，包括转录因子 IRF1、IRF2、IRF8、IRF9 和 RELA，这些转录因子随后激活第二波 ISG。 IFN-γ 信号传导受到以下因素的负调控：含有 SH2 结构域的磷酸酶（SHP 蛋白）与 IFNGR 复合物组成性结合，使激活的酪氨酸残基去磷酸化；细胞因子信号抑制因子（SOCS）蛋白由 IFN-γ 转录诱导，抑制 JAK 并使其泛素化以便降解；以及活化 STAT 蛋白抑制剂（PIAS）阻止 STAT1 与 DNA 的相互作用。T 细胞蛋白酪氨酸磷酸酶 TCP45 使核内 STAT1 去磷酸化，从而实现细胞质循环。 IFN-γ 具有多种功能，包括激活巨噬细胞（作为主要的巨噬细胞激活因子），诱导诱导型一氧化氮合酶的表达，从而产生杀菌性一氧化氮；产生促炎细胞因子 IL-1β、TNF、IL-12、IL-18 和 IL-23；上调 MHC I 类和 II 类分子以及共刺激蛋白 CD80 和 CD86，从而增强抗原呈递；诱导免疫蛋白酶体成分 LMP1、LMP7 和 MECL1，从而改变肽库；上调 TAP-1 和 TAP-2 转运蛋白，将肽转运到内质网；以及激活 MHC II 类转录激活因子 CIITA，从而驱动 II 类表达。该细胞因子通过 STAT1 激活 T-bet 转录因子促进 Th1 分化，上调 IL-12 受体和 IFN-γ 表达，建立正反馈；同时通过维持 IFNGR 表达抑制 Th2 和 Th17 增殖，使这些亚群对 IFN-γ 敏感；促进 B 细胞免疫球蛋白类别从 IgE 向 IgG2a 转换，促进抗体依赖性细胞毒性；通过上调 IL-2 受体、T-bet 和颗粒酶表达增强 CD8+ T 细胞的细胞溶解能力；并激活 NK 细胞对肿瘤细胞和受感染靶细胞的细胞毒性。 IFN-γ在癌症免疫编辑中发挥关键作用，免疫选择可清除表达强新抗原的肿瘤细胞。在IFN-γ不敏感的IFNGR1缺陷或STAT1缺陷小鼠中，肿瘤的发生频率和速度均高于野生型小鼠。免疫介导的清除需要宿主细胞和肿瘤细胞中的IFN-γ信号通路。实验表明，IFN-γ不敏感的肿瘤会持续生长，而IFN-γ敏感的肿瘤在脂多糖治疗后会被清除。然而，该蛋白也具有促肿瘤作用，例如通过上调肿瘤细胞和免疫细胞上的程序性死亡配体1 (PD-L1) 和PD-L2，增强适应性免疫抵抗；通过上调促炎细胞因子和Th17反应促进乳头状瘤的发生；以及通过不受控制的IFN-γ信号通路促进SOCS1缺陷小鼠发生结直肠癌。 IFN-γ除了激活JAK-STAT通路外，还能激活其他信号通路，包括PI3K/Akt/mTOR/p70S6激酶轴（该轴是干扰素刺激基因翻译所必需的，从而产生抗病毒作用）、MAPK通路Pyk2和ERK1/2、TGFβ/SMAD信号通路（该通路诱导NADPH氧化酶NOX1和NOX4产生活性氧，进而引发DNA损伤和细胞衰老），以及不依赖于STAT1的C/EBPβ和巨噬细胞炎症蛋白MIP-1α和MIP-1β的转录。该细胞因子调节造血功能，其过表达可导致骨髓抑制，进而引发骨髓增生异常综合征和再生障碍性贫血；它还具有抗血管生成作用，通过激活ERK1/2通路参与神经发生和神经元分化，并通过mTORC1和MNK激酶调控巨噬细胞代谢，这些激酶最终汇聚于翻译起始因子eIF4E。

背景

干扰素-γ (IFN-γ) 是唯一的 II 型干扰素，它是一种多效性细胞因子，通过作用于除成熟红细胞以外的几乎所有细胞类型，协调先天性和适应性免疫反应。IFN-γ 以非共价连接的同源二聚体形式存在，由两条反平行排列的多肽链组成，每条多肽链包含六个 α 螺旋，形成具有二重对称性的紧密球状结构。其生物活性需要氨基末端残基 1-10 和羧基末端残基 129-143 才能完全结合受体。该蛋白发生 N-糖基化修饰，形成成熟的亚基，在 SDS-PAGE 电泳中迁移至约 25 kDa 处。然而，糖基化修饰的作用是保护蛋白免受蛋白水解酶的攻击，而非直接发挥功能活性。 IFN-γ 的产生主要局限于 T 淋巴细胞（Th1 CD4+ 和细胞毒性 CD8+）和自然杀伤细胞，NK 细胞保持组成型 IFNG 位点可及性，能够在感染或癌症期间通过受体介导的激活快速分泌 IFN-γ。这种激活是通过免疫受体酪氨酸激活基序触发 Src/MAPK/ERK/p38 通路，激活 Fos 和 Jun 转录因子；此外，细胞因子介导的激活主要通过 IL-12 与 IL-12 受体结合，激活 STAT4 和 NF-κB，建立有利于 Th1 反应的正反馈回路。该蛋白结合由IFNGR1（90 kDa，主要配体结合剂）和IFNGR2（62 kDa，亲和力增强剂）组成的异二聚体受体复合物。化学计量比表明，每个IFN-γ同源二聚体结合两个IFNGR1亚基和两个IFNGR2亚基，形成一个2:2:2的信号传导活性复合物。IFNGR1在膜近端LPKS基序处具有组成型JAK1结合位点，其中Pro267对功能至关重要；此外，在YDKPH基序处还有一个可诱导的STAT1对接位点，Tyr440的磷酸化可启动STAT1 SH2结构域的募集。IFNGR2在PPSIPLQIEEYL序列处具有组成型JAK2结合位点。 IFN-γ 配体结合诱导 IFNGR1-IFNGR2 异二聚化，使组成型受体结合但处于非活性状态的 JAK1 和 JAK2 彼此靠近，从而实现自身磷酸化和反式磷酸化，激活这两个激酶。激活的 JAK 磷酸化 IFNGR1 的 Tyr440 位点，形成 STAT1 的结合位点。募集的 STAT1 在此位点经历 JAK 介导的 Tyr701 位点磷酸化以及丝氨酸激酶介导的 Ser727 位点磷酸化，最终被完全激活。磷酸化的 STAT1 分子通过 SH2 结构域与磷酸酪氨酸的相互作用形成同二聚体，从受体解离，转位至细胞核，并与具有 TTNCNNNAA 共有序列的 γ 激活位点 (GAS) DNA 元件结合，驱动干扰素刺激基因的转录，包括转录因子 IRF1、IRF2、IRF8、IRF9 和 RELA，这些转录因子随后激活第二波 ISG。 IFN-γ 信号传导受到以下因素的负调控：含有 SH2 结构域的磷酸酶（SHP 蛋白）与 IFNGR 复合物组成性结合，使激活的酪氨酸残基去磷酸化；细胞因子信号抑制因子（SOCS）蛋白由 IFN-γ 转录诱导，抑制 JAK 并使其泛素化以便降解；以及活化 STAT 蛋白抑制剂（PIAS）阻止 STAT1 与 DNA 的相互作用。T 细胞蛋白酪氨酸磷酸酶 TCP45 使核内 STAT1 去磷酸化，从而实现细胞质循环。 IFN-γ 具有多种功能，包括激活巨噬细胞（作为主要的巨噬细胞激活因子），诱导诱导型一氧化氮合酶的表达，从而产生杀菌性一氧化氮；产生促炎细胞因子 IL-1β、TNF、IL-12、IL-18 和 IL-23；上调 MHC I 类和 II 类分子以及共刺激蛋白 CD80 和 CD86，从而增强抗原呈递；诱导免疫蛋白酶体成分 LMP1、LMP7 和 MECL1，从而改变肽库；上调 TAP-1 和 TAP-2 转运蛋白，将肽转运到内质网；以及激活 MHC II 类转录激活因子 CIITA，从而驱动 II 类表达。该细胞因子通过 STAT1 激活 T-bet 转录因子促进 Th1 分化，上调 IL-12 受体和 IFN-γ 表达，建立正反馈；同时通过维持 IFNGR 表达抑制 Th2 和 Th17 增殖，使这些亚群对 IFN-γ 敏感；促进 B 细胞免疫球蛋白类别从 IgE 向 IgG2a 转换，促进抗体依赖性细胞毒性；通过上调 IL-2 受体、T-bet 和颗粒酶表达增强 CD8+ T 细胞的细胞溶解能力；并激活 NK 细胞对肿瘤细胞和受感染靶细胞的细胞毒性。 IFN-γ在癌症免疫编辑中发挥关键作用，免疫选择可清除表达强新抗原的肿瘤细胞。在IFN-γ不敏感的IFNGR1缺陷或STAT1缺陷小鼠中，肿瘤的发生频率和速度均高于野生型小鼠。免疫介导的清除需要宿主细胞和肿瘤细胞中的IFN-γ信号通路。实验表明，IFN-γ不敏感的肿瘤会持续生长，而IFN-γ敏感的肿瘤在脂多糖治疗后会被清除。然而，该蛋白也具有促肿瘤作用，例如通过上调肿瘤细胞和免疫细胞上的程序性死亡配体1 (PD-L1) 和PD-L2，增强适应性免疫抵抗；通过上调促炎细胞因子和Th17反应促进乳头状瘤的发生；以及通过不受控制的IFN-γ信号通路促进SOCS1缺陷小鼠发生结直肠癌。 IFN-γ除了激活JAK-STAT通路外，还能激活其他信号通路，包括PI3K/Akt/mTOR/p70S6激酶轴（该轴是干扰素刺激基因翻译所必需的，从而产生抗病毒作用）、MAPK通路Pyk2和ERK1/2、TGFβ/SMAD信号通路（该通路诱导NADPH氧化酶NOX1和NOX4产生活性氧，进而引发DNA损伤和细胞衰老），以及不依赖于STAT1的C/EBPβ和巨噬细胞炎症蛋白MIP-1α和MIP-1β的转录。该细胞因子调节造血功能，其过表达可导致骨髓抑制，进而引发骨髓增生异常综合征和再生障碍性贫血；它还具有抗血管生成作用，通过激活ERK1/2通路参与神经发生和神经元分化，并通过mTORC1和MNK激酶调控巨噬细胞代谢，这些激酶最终汇聚于翻译起始因子eIF4E。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29661791/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30191398/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%