IGFBP3 Antibody [G15L3]

目录号: F9208

抗体应用：反应性：Human

Lane 1: AsPC-1

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例
WB1:1000 IP1:100 IHC1:200 - 1:800 IF1:400 - 1:1600

抗体应用
WB, IP, IHC, IF

反应性
Human

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量
19 kDa

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
IGFBP3 Antibody [G15L3] 可检测内源性 IGFBP3 总蛋白水平。

克隆号
G15L3

别名
acid stable subunit of the 140 K IGF complex; binding protein 29; binding protein 53; BP-53; IBP-3; IBP3; IGF-binding protein 3; IGFBP-3; IGFBP3; insulin like growth factor binding protein 3

背景
胰岛素样生长因子结合蛋白-3 (IGFBP3) 是人体循环中六个IGFBP家族成员中最丰富的成员，主要作为胰岛素样生长因子IGF-I和IGF-II的主要载体蛋白，与酸不稳定亚基形成三元复合物。IGFBP3可将IGF的半衰期从几分钟延长至超过12小时，并通过高亲和力螯合调节IGF的生物利用度。IGFBP3包含三个结构域：一个高度保守的富含半胱氨酸的N端结构域，含有12个半胱氨酸残基，形成6个域内二硫键；一个非保守的中央连接结构域；以及一个保守的富含半胱氨酸的C端结构域，含有6个半胱氨酸残基，形成3个二硫键。这两个末端结构域通过不同的接触残基协同作用，共同产生纳摩尔级的结合亲和力，从而促进IGF的结合。该蛋白质经历翻译后修饰，包括三个天冬酰胺残基（Asn89、Asn109、Asn172）的 N-糖基化，导致碳水化合物含量变化，产生可通过蛋白质印迹检测到的特征性双条带；酪蛋白激酶 2 和 DNA 依赖性蛋白激酶在多个丝氨酸残基上的磷酸化，改变糖胺聚糖结合和 IGF 亲和力；以及基质金属蛋白酶和妊娠相关血浆蛋白 A2 的蛋白水解切割，降低 IGF 结合亲和力，从而释放具有生物活性的 IGF 以激活受体。 IGFBP3 通过多种机制调节 IGF 依赖性细胞过程——通过隔离 IGF-I 和 IGF-II 阻止受体接近，从而经典地抑制 IGF1R 信号传导；通过与细胞表面糖胺聚糖和细胞外基质蛋白相互作用，将 IGF 集中在受体附近，从而增强 IGF1R 的激活；以及通过与转化生长因子-β 受体 V 型 (TGFβRV/LRP1) 结合后激活蛋白磷酸酶 2A，从而抑制 IGF1R 信号传导，导致 Akt 和 Ras/MAPK 通路成分去磷酸化。该蛋白通过与跨膜蛋白219 (TMEM219)、TGFβRI、TGFβRII和TGFβRV受体的相互作用，在细胞表面执行广泛的IGF非依赖性功能。TMEM219的结合触发caspase-8依赖性细胞凋亡，并形成钙/钙调蛋白依赖性复合物诱导自噬；而TGFβRV的配体结合激活蛋白磷酸酶2A，下调Akt存活通路。IGFBP3具有细胞穿透肽特性，这由其C端区域内重叠的糖胺聚糖结合域、核定位信号域和金属结合域介导，使其能够通过转铁蛋白受体相互作用介导的网格蛋白内吞作用、涉及caveolin-1的caveolae介导的内吞作用以及液相胞饮作用进入细胞，其中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖促进其与细胞膜的结合和内化。内吞后，IGFBP3 通过直接与 importin-β 结合，以 ATP 和 GTP 依赖的方式转位至细胞核，该过程不依赖于 importin-α 衔接蛋白。其 C 端结构域内的双元核定位信号引导 IGFBP3 在细胞核内积累，并受多聚泛素化和蛋白酶体降解的调控。核内 IGFBP3 通过与 II 类核激素受体（包括类视黄醇 X 受体-α 和维生素 D 受体）相互作用发挥转录调节作用，调节它们的转录活性；它还能与 DNA 依赖性蛋白激酶催化亚基结合，参与非同源末端连接双链 DNA 修复途径；此外，它还与多种转录因子相互作用，影响调控细胞凋亡、细胞周期进程和代谢稳态的基因表达程序。 IGFBP3 通过多种机制调节自噬——在葡萄糖和氧气缺乏的情况下，低糖基化的 IGFBP3 与葡萄糖调节蛋白 78 (GRP78) 结合，诱导营养胁迫的乳腺癌细胞的自噬存活反应；TMEM219-钙调蛋白-钙/钙调蛋白依赖性激酶 II 复合物的形成触发肾脏上皮细胞的自噬；支气管上皮细胞中白细胞介素-13 诱导的自噬依赖于 IGFBP3；而在角膜上皮中，IGFBP3 通过调节 BNIP3L/NIX 线粒体自噬受体的表达来抑制线粒体自噬，维持线粒体功能，核积累与线粒体呼吸和嵴形态的改变相关。该蛋白质通过上调鞘氨醇激酶 1 的活性来调节鞘脂代谢，生成促生存的鞘氨醇 1-磷酸，同时降低促凋亡的神经酰胺水平，通过鞘氨醇 1-磷酸受体信号传导增强配体依赖性的 IGF1R 和 EGFR 的激活，其中 EGFR 反式激活 IGF1R 而不依赖于 IGF 结合。 IGFBP3 表现出依赖于环境的促凋亡或抗凋亡功能——该蛋白通过 caspase 依赖性机制诱导前列腺癌细胞凋亡，该机制独立于 IGF 结合、分泌或核浓度；激活 STAT-1 并抑制乳腺癌细胞中的 Akt/IGF-1R 生存通路，促进凋亡；然而矛盾的是，三阴性乳腺癌异种移植瘤中高水平的核 IGFBP3 与裂解的 caspase-3 呈负相关，并预示着生存期缩短，肿瘤生长是由 IGFBP3 刺激的鞘氨醇激酶 1 和 EGFR 激活驱动的。 IGFBP3 的表达在转录和翻译后水平受到调控，其紊乱与多种恶性肿瘤有关——循环 IGFBP3 减少与 IGF-I 升高相关，与乳腺癌、结肠癌、肺癌和前列腺癌风险增加相关；p53 肿瘤抑制因子直接诱导 IGFBP3 转录，使其成为 p53 调控的生长抑制剂；恶性细胞中的 IGFBP3 水平相对于正常组织下降；前列腺癌中核 IGFBP3 升高可显著预测肿瘤复发，同时可作为预后标志物和潜在的治疗靶点。

背景

胰岛素样生长因子结合蛋白-3 (IGFBP3) 是人体循环中六个IGFBP家族成员中最丰富的成员，主要作为胰岛素样生长因子IGF-I和IGF-II的主要载体蛋白，与酸不稳定亚基形成三元复合物。IGFBP3可将IGF的半衰期从几分钟延长至超过12小时，并通过高亲和力螯合调节IGF的生物利用度。IGFBP3包含三个结构域：一个高度保守的富含半胱氨酸的N端结构域，含有12个半胱氨酸残基，形成6个域内二硫键；一个非保守的中央连接结构域；以及一个保守的富含半胱氨酸的C端结构域，含有6个半胱氨酸残基，形成3个二硫键。这两个末端结构域通过不同的接触残基协同作用，共同产生纳摩尔级的结合亲和力，从而促进IGF的结合。该蛋白质经历翻译后修饰，包括三个天冬酰胺残基（Asn89、Asn109、Asn172）的 N-糖基化，导致碳水化合物含量变化，产生可通过蛋白质印迹检测到的特征性双条带；酪蛋白激酶 2 和 DNA 依赖性蛋白激酶在多个丝氨酸残基上的磷酸化，改变糖胺聚糖结合和 IGF 亲和力；以及基质金属蛋白酶和妊娠相关血浆蛋白 A2 的蛋白水解切割，降低 IGF 结合亲和力，从而释放具有生物活性的 IGF 以激活受体。 IGFBP3 通过多种机制调节 IGF 依赖性细胞过程——通过隔离 IGF-I 和 IGF-II 阻止受体接近，从而经典地抑制 IGF1R 信号传导；通过与细胞表面糖胺聚糖和细胞外基质蛋白相互作用，将 IGF 集中在受体附近，从而增强 IGF1R 的激活；以及通过与转化生长因子-β 受体 V 型 (TGFβRV/LRP1) 结合后激活蛋白磷酸酶 2A，从而抑制 IGF1R 信号传导，导致 Akt 和 Ras/MAPK 通路成分去磷酸化。该蛋白通过与跨膜蛋白219 (TMEM219)、TGFβRI、TGFβRII和TGFβRV受体的相互作用，在细胞表面执行广泛的IGF非依赖性功能。TMEM219的结合触发caspase-8依赖性细胞凋亡，并形成钙/钙调蛋白依赖性复合物诱导自噬；而TGFβRV的配体结合激活蛋白磷酸酶2A，下调Akt存活通路。IGFBP3具有细胞穿透肽特性，这由其C端区域内重叠的糖胺聚糖结合域、核定位信号域和金属结合域介导，使其能够通过转铁蛋白受体相互作用介导的网格蛋白内吞作用、涉及caveolin-1的caveolae介导的内吞作用以及液相胞饮作用进入细胞，其中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖促进其与细胞膜的结合和内化。内吞后，IGFBP3 通过直接与 importin-β 结合，以 ATP 和 GTP 依赖的方式转位至细胞核，该过程不依赖于 importin-α 衔接蛋白。其 C 端结构域内的双元核定位信号引导 IGFBP3 在细胞核内积累，并受多聚泛素化和蛋白酶体降解的调控。核内 IGFBP3 通过与 II 类核激素受体（包括类视黄醇 X 受体-α 和维生素 D 受体）相互作用发挥转录调节作用，调节它们的转录活性；它还能与 DNA 依赖性蛋白激酶催化亚基结合，参与非同源末端连接双链 DNA 修复途径；此外，它还与多种转录因子相互作用，影响调控细胞凋亡、细胞周期进程和代谢稳态的基因表达程序。 IGFBP3 通过多种机制调节自噬——在葡萄糖和氧气缺乏的情况下，低糖基化的 IGFBP3 与葡萄糖调节蛋白 78 (GRP78) 结合，诱导营养胁迫的乳腺癌细胞的自噬存活反应；TMEM219-钙调蛋白-钙/钙调蛋白依赖性激酶 II 复合物的形成触发肾脏上皮细胞的自噬；支气管上皮细胞中白细胞介素-13 诱导的自噬依赖于 IGFBP3；而在角膜上皮中，IGFBP3 通过调节 BNIP3L/NIX 线粒体自噬受体的表达来抑制线粒体自噬，维持线粒体功能，核积累与线粒体呼吸和嵴形态的改变相关。该蛋白质通过上调鞘氨醇激酶 1 的活性来调节鞘脂代谢，生成促生存的鞘氨醇 1-磷酸，同时降低促凋亡的神经酰胺水平，通过鞘氨醇 1-磷酸受体信号传导增强配体依赖性的 IGF1R 和 EGFR 的激活，其中 EGFR 反式激活 IGF1R 而不依赖于 IGF 结合。 IGFBP3 表现出依赖于环境的促凋亡或抗凋亡功能——该蛋白通过 caspase 依赖性机制诱导前列腺癌细胞凋亡，该机制独立于 IGF 结合、分泌或核浓度；激活 STAT-1 并抑制乳腺癌细胞中的 Akt/IGF-1R 生存通路，促进凋亡；然而矛盾的是，三阴性乳腺癌异种移植瘤中高水平的核 IGFBP3 与裂解的 caspase-3 呈负相关，并预示着生存期缩短，肿瘤生长是由 IGFBP3 刺激的鞘氨醇激酶 1 和 EGFR 激活驱动的。 IGFBP3 的表达在转录和翻译后水平受到调控，其紊乱与多种恶性肿瘤有关——循环 IGFBP3 减少与 IGF-I 升高相关，与乳腺癌、结肠癌、肺癌和前列腺癌风险增加相关；p53 肿瘤抑制因子直接诱导 IGFBP3 转录，使其成为 p53 调控的生长抑制剂；恶性细胞中的 IGFBP3 水平相对于正常组织下降；前列腺癌中核 IGFBP3 升高可显著预测肿瘤复发，同时可作为预后标志物和潜在的治疗靶点。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36974712/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23700234/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%