Integrin αVβ3 Antibody [C22M19]

目录号: F2133

抗体应用：反应性：Rat, Chicken, Human

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
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使用信息

稀释比例

抗体应用
IP, IHC, IF, FCM

反应性
Rat, Chicken, Human

抗体类型
Mouse Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

实验方法

IF
实验步骤：样品准备 1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。 2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。 3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。 4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。固定 1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。通透 1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。） 2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。封闭添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。免疫荧光染色（第一天） 1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。 2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。免疫荧光染色（第二天） 1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。 3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。 4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。 5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。封片 1. 抗荧光淬灭封片剂封片。 2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。 3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

实验步骤：

样品准备

1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。

2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。

3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。

4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。

固定

1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

通透

1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。

（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）

2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。

封闭

添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）

注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。

免疫荧光染色（第一天）

1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。

2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。

免疫荧光染色（第二天）

1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。

3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。

4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光孵育 5~10 min。

5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。

封片

1. 抗荧光淬灭封片剂封片。

2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。

3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。

IHC
实验步骤：脱蜡/补液 1. 脱蜡/水合切片： 2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。 3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。 4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。 5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。染色 1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。 2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。 3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。 5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。 6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。 7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。 9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。 10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。 11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。 12. 将载玻片浸入 dH2O 中。 13. 如果需要，用苏木精复染切片。 14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。 15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。 16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

IHC

实验步骤：

脱蜡/补液

1. 脱蜡/水合切片：

2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。

3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。

4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。

5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾；在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。在工作台上冷却玻片 30 分钟。

染色

1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。

2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。

3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。

5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。

6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。

7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。在加湿室中室温孵育 30 分钟。

9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。

10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。

11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。

12. 将载玻片浸入 dH2O 中。

13. 如果需要，用苏木精复染切片。

14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒；在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒；在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。

16. 用盖玻片和封固剂封固切片。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Integrin αVβ3 Antibody [C22M19] 可检测内源性 Integrin αVβ3 总蛋白水平。

蛋白定位
细胞连接，细胞膜，细胞突起，内膜系统，突触后膜，突触

Uniprot ID
P05106

克隆号
C22M19

别名
CD51; MSK8; VNRA; VTNR; ITGAV; Integrin alpha-V; Vitronectin receptor; Vitronectin receptor subunit alpha

背景
整合素 αVβ3 是一种广泛表达于内皮细胞、血小板、破骨细胞和肿瘤细胞上的混杂型 RGD 结合异二聚体粘附受体，它由 αV 的七叶 β 螺旋桨和大腿结构域组成头部，位于 β3 的 βI（具有金属离子依赖性粘附位点的 vWFA 样结构域，MIDAS）、混合结构域和 PSI 结构域之上，并通过小腿 1/2 (αV) 和 EGF 样 IE1-4 加 β 尾 (β3) 延伸，在低亲和力闭合构象中，其短的跨膜螺旋和胞质尾能够实现 talin 介导的由内而外的激活。 αV螺旋桨-βI界面处的配体结合（由MIDAS、ADMIDAS和LIMBS处的Mn²⁺/Mg²⁺/Ca²⁺协调）触发头部打开（约130°摆动）、膝部伸展和α/β TM螺旋的刚体分离，传播“弹簧刀状”构象波，使受体聚集到高亲和力状态以实现牢固粘附，同时募集FAK/Src/paxillin以激活PI3K/Akt、MAPK/ERK和Rho GTPase通路，从而驱动血管生成、迁移、存活和基质重塑；相反，通过力依赖性捕获键（剪切力下亲和力增加约10倍）的由外向内信号传导增强细胞骨架锚定。失调的 αVβ3 可促进肿瘤/年龄相关性黄斑变性中的病理性新生血管形成、骨质疏松症中破骨细胞介导的骨吸收、通过血小板在玻连蛋白/纤连蛋白上的聚集而导致的血栓形成以及动脉粥样硬化中的动脉重塑，而破坏 IE2-大腿界面的治疗性拮抗剂或突变会损害激活并抑制这些过程。

背景

整合素 αVβ3 是一种广泛表达于内皮细胞、血小板、破骨细胞和肿瘤细胞上的混杂型 RGD 结合异二聚体粘附受体，它由 αV 的七叶 β 螺旋桨和大腿结构域组成头部，位于 β3 的 βI（具有金属离子依赖性粘附位点的 vWFA 样结构域，MIDAS）、混合结构域和 PSI 结构域之上，并通过小腿 1/2 (αV) 和 EGF 样 IE1-4 加 β 尾 (β3) 延伸，在低亲和力闭合构象中，其短的跨膜螺旋和胞质尾能够实现 talin 介导的由内而外的激活。 αV螺旋桨-βI界面处的配体结合（由MIDAS、ADMIDAS和LIMBS处的Mn²⁺/Mg²⁺/Ca²⁺协调）触发头部打开（约130°摆动）、膝部伸展和α/β TM螺旋的刚体分离，传播“弹簧刀状”构象波，使受体聚集到高亲和力状态以实现牢固粘附，同时募集FAK/Src/paxillin以激活PI3K/Akt、MAPK/ERK和Rho GTPase通路，从而驱动血管生成、迁移、存活和基质重塑；相反，通过力依赖性捕获键（剪切力下亲和力增加约10倍）的由外向内信号传导增强细胞骨架锚定。失调的 αVβ3 可促进肿瘤/年龄相关性黄斑变性中的病理性新生血管形成、骨质疏松症中破骨细胞介导的骨吸收、通过血小板在玻连蛋白/纤连蛋白上的聚集而导致的血栓形成以及动脉粥样硬化中的动脉重塑，而破坏 IE2-大腿界面的治疗性拮抗剂或突变会损害激活并抑制这些过程。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23106217/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19704023/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%