Mast Cell Chymase Antibody (Rabbit mAb) [C20M13]
目录号: F8677
抗体应用：
反应性：
-
Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human colon tissue with F8677 at 1:50 dilution.
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| IHC |
| 反应性 |
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| Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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27 kDa
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| 阳性对照 | Human prostate adenocarcinoma; Human urothelial carcinoma; Human breast adenocarcinoma; Human endometrioid adenocarcinoma; Normal human colon; Normal human thymus; Normal human small intestine; Normal human esophagus; Human thymoma; Normal human uterus; Normal human lymph node; Normal human urothelial carcinoma; Normal human esophagus |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| IHC |
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实验步骤：
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| Mast Cell Chymase Antibody (Rabbit mAb) [C20M13] 可检测内源性 Mast Cell Chymase 总蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P23946 |
| 克隆号 |
|---|
| C20M13 |
| 别名 |
|---|
| Alpha-chymase; Chymase; chymase 1; chymase 1, mast cell; chymase, heart; chymase, mast cell; CMA1; CYH; CYM; Mast cell protease I; MCT1; MGC119890; MGC119891 |
| 背景 |
|---|
| 肥大细胞糜蛋白酶（糜蛋白酶1，CMA1）是一种类胰凝乳蛋白酶的丝氨酸蛋白酶，储存于结缔组织型肥大细胞的分泌颗粒中，并在激活后释放。它作为一种多功能效应酶，在炎症和组织重塑部位加工肽类、细胞因子和基质成分。该酶具有典型的胰蛋白酶/糜蛋白酶折叠结构，其催化活性位点His-Asp-Ser三联体位于底物结合槽中，该位点优先结合P1位的芳香族残基。其依赖于肝素的包装使其能够进入肥大细胞颗粒，从而在脱颗粒后进行快速的局部蛋白水解。血管紧张素I是一种重要的生理底物，人糜蛋白酶能高效地将血管紧张素I在组织间隙转化为血管紧张素II，从而为心脏和血管中的血管紧张素II生成提供了一条主要的非ACE途径，并参与局部血管张力调节、心脏重塑和动脉粥样硬化的发生。糜蛋白酶还能加工细胞外基质和基质调节系统的成分，包括激活基质金属蛋白酶和加工I型前胶原，这些过程将肥大细胞脱颗粒与胶原蛋白周转、纤维化基质沉积以及血管壁和实质器官的结构改变联系起来。细胞因子和生长因子的生物利用度受糜蛋白酶的强烈影响，糜蛋白酶能将前体IL-1β转化为其活性形式，降解IL-4，并诱导膜结合干细胞因子的释放，从而以反馈敏感的方式调节局部炎症细胞募集、辅助性T细胞极化和肥大细胞存活。糜蛋白酶作为白细胞趋化因子，通过蛋白酶激活机制和细胞周围基质重塑促进嗜酸性粒细胞和其他炎症细胞的迁移，从而整合肥大细胞活化与下游效应白细胞的募集和活化，在过敏和慢性炎症环境中发挥作用。在气道疾病中，肥大细胞糜蛋白酶通过降解细胞周围基质、刺激胶原纤维形成和增强TGF-β活化，促进气道平滑肌和黏膜下层的重塑，使糜蛋白酶活性与支气管高反应性、气道壁增厚以及哮喘和慢性阻塞性肺疾病的特征密切相关。心血管疾病，包括高血压、心肌梗死、动脉瘤形成和瓣膜疾病，都与肥大细胞糜酶活性增加有关，其血管紧张素 II 生成能力、基质修饰作用和促纤维化信号作用汇聚在一起，从而驱动不良重塑、新生血管形成和斑块不稳定。 |
| 参考文献 |
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