MMP-7 Antibody (Rabbit mAb) [G24L14]
目录号: F3076
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Recombinant(GST) Rat MMP-7 Protein
操作要点
WB
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
湿转参考条件：200 mA, 60 min。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IHC, IP |
| 反应性 |
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| Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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30 kDa
28 kDa, 20-22 kDa
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | Mouse small intestine; Rat prostate |
|---|---|
| 阴性对照 | Mouse colon |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 60 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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| IHC |
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实验步骤：
脱蜡/补液
1. 脱蜡/水合切片：
2. 将切片在二甲苯中孵育 3 次，每次 5 分钟。
3. 将切片在 100% 乙醇中孵育两次，每次 10 分钟。
4. 将切片在 95% 乙醇洗涤液中孵育两次，每次 10 分钟。
5. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
6.抗原修复：对于柠檬酸盐：将载玻片浸入 1X 柠檬酸盐暴露溶液中，在微波炉中加热，直至开始沸腾； 在亚沸温度 (95°-98°C) 下继续煮 10 分钟。 在工作台上冷却玻片 30 分钟。
染色
1. 用 dH2O 清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
2. 将切片在 3% 过氧化氢中孵育 10 分钟。
3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
4. 在洗涤缓冲液中洗涤切片 5 分钟。
5. 用 100–400 µl 封闭液在室温下封闭每个切片 1 小时。
6. 除去封闭液，并向每个切片中添加 100–400 µl 一抗稀释液。 4°C 孵育过夜。
7. 去除抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
8. 用 1-3 滴所需的 HRPA 覆盖切片。 在加湿室中室温孵育 30 分钟。
9. 用洗涤缓冲液洗涤切片 3 次，每次 5 分钟。
10. 使用前将 DAB 显色剂浓缩液加入 DAB 稀释液中并充分混合。
11. 在每个切片上涂抹 100–400 µl DAB 并密切监测。 1-10 分钟通常可提供可接受的染色强度。
12. 将载玻片浸入 dH2O 中。
13. 如果需要，用苏木精复染切片。
14. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
15. 切片脱水：95%乙醇孵育切片两次，每次 10 秒； 在 100% 乙醇中重复，孵育切片两次，每次 10 秒； 在二甲苯中重复，孵育切片两次，每次 10 秒。
16. 用盖玻片和封固剂封固切片。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| MMP-7 Antibody (Rabbit mAb) [G24L14] 可检测内源性 MMP-7 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞外基质，细胞外环境 |
| Uniprot ID |
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| Q10738 |
| 克隆号 |
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| G24L14 |
| 别名 |
|---|
| MAT; Matrilysin; matrilysin, uterine; Matrin; matrix metallopeptidase 7; matrix metalloproteinase 7; Matrix metalloproteinase-7; MMP-7; Mmp7; Pump-1 protease; Uterine metalloproteinase |
| 背景 |
|---|
| MMP-7，又称基质溶解素，是一种分泌型锌依赖性内肽酶，属于基质金属蛋白酶家族。它是一种“最小结构域”MMP，缺乏大型血红素结合蛋白样C端结构域，却能高效切割多种细胞外基质和非基质底物，使其成为组织重塑和肿瘤生物学中一种结构紧凑但功能多样的调节因子。该蛋白以潜伏型前体酶的形式合成，前体酶包含一个N端信号肽、一个通过“半胱氨酸开关”维持催化锌处于非活性构象的前结构域，以及一个具有保守的HEXGHXXGXXHS基序和锌离子、钙离子结合位点的催化结构域。前结构域的蛋白水解去除可生成活性MMP-7，后者能够降解基质成分，例如蛋白聚糖、纤连蛋白、层粘连蛋白和弹性蛋白，从而促进基底膜和基质重塑。 MMP-7 的作用不仅限于降解细胞外基质 (ECM)，它还能加工一系列非 ECM 蛋白，从而调节细胞生长、存活和侵袭：它切割胰岛素样生长因子结合蛋白，提高 IGF 的生物利用度并促进细胞增殖；将膜结合的肝素结合 EGF 前体 (proHB-EGF) 转化为成熟的 HB-EGF，后者可刺激 EGFR 信号通路；并将细胞表面的 Fas 配体和 TNF-α 前体转化为可溶性形式，从而影响肿瘤微环境中邻近细胞的凋亡。MMP-7 还能切割 E-钙黏蛋白，生成可溶性 E-钙黏蛋白片段，这些片段可削弱细胞间黏附并促进侵袭；此外，它还参与其他黏附分子和信号分子胞外域的脱落，从而协调支持肿瘤进展的结构和信号变化。在血管生成过程中，重组MMP-7能够以剂量依赖的方式直接促进人脐静脉内皮细胞在I型和IV型胶原上的增殖，并上调内皮细胞分泌MMP-1和MMP-2，而不影响VEGF的产生。这表明MMP-7可通过增强局部蛋白酶环境，促进基底膜溶解、内皮细胞迁移和新生血管形成，从而发挥促血管生成因子的作用。对多种癌症的表达分析显示，MMP-7在包括结直肠癌、胃癌、肺癌和前列腺癌在内的上皮肿瘤中经常过表达，且其表达水平与肿瘤分期晚期、淋巴结转移和预后不良相关。因此，MMP-7被认为是一种致癌效应因子，可通过多种机制介导细胞增殖、分化、转移和侵袭。在结直肠癌中，MMP-7由癌诱导的新生血管分泌，并作为转移因子发挥作用；而在肺腺癌中，COX-2上调MMP-7的表达，促进肿瘤细胞的增殖和侵袭，将炎症性COX-2信号通路与蛋白酶依赖性侵袭行为联系起来。除肿瘤学外，MMP-7还参与肾脏疾病，作为肾小管和间质重塑的调节因子，尿液MMP-7正逐渐成为肾损伤的敏感生物标志物，反映了其在细胞外基质（ECM）更新和纤维化中的作用。 MMP-7 具有最小结构域金属蛋白酶结构，可通过去除前结构域激活，能够切割 ECM 和关键的非 ECM 调节因子（IGFBP、HB-EGF、FasL、TNF-α、E-钙黏蛋白），并且在血管生成、肿瘤侵袭、转移和器官损伤中发挥着重要作用，使其成为评估癌症、纤维化、免疫病理中蛋白酶驱动的重塑的机制丰富的靶点，并可用于探索 MMP-7 作为疾病相关微环境中的诊断和治疗节点。 |
| 参考文献 |
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