MRP3/ABCC3 Antibody [L20F24]
目录号: F4101
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Human liver, Lane 2: Mouse liver, Lane 3: Rat liver
操作要点
WB
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
建议曝光 60s 以上。
建议 SDS-PAGE 分离胶浓度：5%。
建议曝光 60s 以上。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
|---|
| Human, Mouse, Rat |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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160-220 kDa
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| 阳性对照 | Human liver; Mouse liver; Rat liver; C2C12 cells; mIMCD-3 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
|---|
实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），冰上静置裂解 5 min。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 在 20 μL 样品中加入蛋白上样缓冲液，可直接冰上备用；或通过温度梯度（如37 ℃煮样、50 ℃煮样、70 ℃煮样、90 ℃煮样、100 ℃煮样）来确定最佳变性条件，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：5 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。(建议曝光时长 60s 以上)。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| MRP3/ABCC3 Antibody [L20F24] 可检测内源性 MRP3/ABCC3 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞膜，内膜系统 |
| Uniprot ID |
|---|
| O15438 |
| 克隆号 |
|---|
| L20F24 |
| 别名 |
|---|
| ATP-binding cassette sub-family C member 3; Canalicular multispecific organic anion transporter 2; Multi-specific organic anion transporter D (MOAT-D); Multidrug resistance-associated protein 3; ABCC3; CMOAT2; MLP2; MRP3 |
| 背景 |
|---|
| MRP3 (ABCC3) 是一种膜结合的 ATP 结合盒 (ABC) 转运蛋白，属于多药耐药相关蛋白亚家族，它作为关键的外排泵，可将多种有机阴离子和结合型外源性物质排出至极化的上皮细胞。MRP3 主要定位于肝细胞、肠细胞、肾小管细胞和肾上腺上皮细胞的基底外侧质膜，在那里，它将 ATP 水解与单阴离子胆汁酸、葡萄糖醛酸化和硫酸化代谢物以及包括依托泊苷和紫杉醇在内的化疗药物等化合物的外排偶联，从而防止细胞内蓄积，并有助于细胞解毒和屏障功能。在肝脏中，MRP3介导的胆汁酸结合物和药物代谢物从基底外侧膜外排入肝窦血液，支持胆肝循环和肠肝循环。在胆汁淤积期间，MRP3的诱导表达作为一种适应性机制，通过将胆汁阴离子分流至体循环进行肾脏排泄，从而缓解胆道梗阻相关的毒性。而在肠道中，MRP3调节口服药物和内源性阴离子的净吸收和全身暴露量。MRP3的表达受核受体（如PXR、CAR和FXR）以及促炎和胆汁淤积信号通路的转录调控。在MRP2缺陷的杜宾-约翰逊综合征中，MRP3的表达上调，凸显了其在功能性胆小管输出缺失的情况下维持胆汁酸及其结合物外排的代偿作用。在肝细胞癌、卵巢恶性肿瘤和急性白血病中观察到 MRP3 水平升高，它通过降低细胞内药物浓度而导致化疗耐药性，并且与成人急性淋巴细胞白血病和髓系白血病的预后较差有关。 |
| 参考文献 |
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