NUP153 Antibody (Mouse mAb) [L18J13]
目录号: F1570
抗体应用：
反应性：
-
Immunofluorescent analysis of Hela cells using F1570 (green, 1:2000), Hoechst (blue) and tubulin (Red).
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| IF |
| 反应性 |
|---|
| Mouse, Human |
| 抗体类型 |
|---|
| Mouse Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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154 kDa
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| 阳性对照 | NIH3T3 cells; HeLa cells; U2OS cells; 3T3 cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| IF |
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实验步骤：
样品准备
1. 贴壁细胞：取洁净无菌盖玻片置于培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片。
2. 悬浮细胞：将细胞接种至多聚赖氨酸包被的洁净无菌载玻片上。
3. 冰冻切片：将玻片置于室温下解冻，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。
4. 石蜡切片：先将玻片脱蜡至水，纯水或 PBS 摇洗 3次，每次 3 min。然后进行抗原修复。
固定
1. 使用固定液，如4%多聚甲醛（4% PFA）室温固定细胞爬片/涂片或组织切片 10~15 min。
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
通透
1. 对样品添加去垢剂，如 0.1~0.3% Triton X-100，室温通透 10~20 min。
（仅针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则可省略该步骤。）
2. 使用 PBS 摇洗样品 3次，每次 3 min。
封闭
添加封闭液，在室温下封闭至少 1 h。（常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或山羊血清。）
注意事项：从封闭开始之后的所有步骤务必保证样品湿润，避免干燥，否则极易产生高背景。
免疫荧光染色（第一天）
1. 吸走封闭液，滴加稀释后的一抗。
2. 湿盒中 4°C 孵育过夜。
免疫荧光染色（第二天）
1. 吸走一抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
2. 滴加稀释后的荧光二抗，避光 4°C 孵育 1~2 h。
3. 吸走二抗，PBST 摇洗 3 次，每次 5 min。
4. 滴加稀释后的 DAPI，室温避光 孵育 5~10 min。
5. PBST 中摇洗 3 次，每次 5 分钟。
封片
1. 抗荧光淬灭封片剂封片。
2. 干燥玻片，将玻片置于室温下避光过夜。
3. 将载玻片放入玻片盒中 4°C 避光保存。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| NUP153 Antibody (Mouse mAb) [L18J13] 可检测内源性 NUP153 总蛋白水平。 |
| Uniprot ID |
|---|
| P49790 |
| 克隆号 |
|---|
| L18J13 |
| 别名 |
|---|
| Nuclear pore complex protein Nup153, 153 kDa nucleoporin, Nucleoporin Nup153, NUP153 |
| 背景 |
|---|
| NUP153是一种脊椎动物核孔蛋白，属于含有FG重复序列的核孔复合体组分家族，是核篮的主要组成部分。它连接中央转运通道和外周核结构，并定义了核孔与基因组之间的关键界面。该蛋白具有模块化结构，其N端区域锚定于核孔支架，中央区域富含锌指结构域，C端区域则密集排列着FG重复序列，这些序列与转运受体和其他核孔蛋白相互作用，从而为跨核膜的大分子交换创造选择性环境。Nup153与核孔的核相结合，参与多种货物的输入和输出，包括核输入蛋白依赖性蛋白底物和多种RNA。它参与末端对接和释放步骤，从而决定核质转运的方向性和效率。该蛋白还与Tpr和其他篮状核孔蛋白协同作用，支持特定RNA种类的保留和质量控制，将输出能力与监控功能相结合，从而影响哪些转录本到达细胞质以及到达细胞质的速率。Nup153与染色质建立广泛的接触，并定义富含常染色质特征、高RNA聚合酶II占位率和转录活性基因的大型核孔蛋白相关区域，将核孔组分与全基因组转录程序连接起来。这些Nup153结合区域包括果蝇X染色体上参与剂量补偿的基因簇，其中Nup153的功能对于剂量补偿复合物的正常活性以及维持雄性X连锁基因的增强转录输出是必需的。 Nup153 与染色质的结合跨越数十至数百千碱基的基因组片段，形成有利于基因邻域协同表达而非孤立启动子表达的拓扑环境，这种组织结构有助于维持细胞核内大范围的转录活性区域。Nup153 水平的扰动会改变大部分基因组的表达，尤其是在核孔蛋白相关区域，其表达显著下调，这表明该核孔蛋白除了在物质转运中发挥作用外，还具有全局转录调控功能。 |
| 参考文献 |
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