OAS1 Antibody (Rabbit mAb) [N5C17]
目录号: F0953
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Hela, Lane 2: Hela (hIFN-α1, 10 ng/ml, 16 h)
操作要点
WB
建议曝光 90s 以上。
建议曝光 90s 以上。
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB, IP |
| 反应性 |
|---|
| Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
|---|
| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
实际分子量
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46 kDa
40 kDa, 44 kDa
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| *为什么预测分子量和实际分子量会有不同？ 以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。 |
| 阳性对照 | NCI-H460 cells; NCI-H460 cells; HeLa cells(hIFN-α1, 10 ng/ml, 16 h) |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。 (建议曝光时长 90s 以上)。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| OAS1 Antibody (Rabbit mAb) [N5C17] 可检测内源性 OAS1 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 细胞质，内质网，微粒体 |
| Uniprot ID |
|---|
| P00973 |
| 克隆号 |
|---|
| N5C17 |
| 别名 |
|---|
| (2-5')oligo(A) synthase 1, (2-5')oligo(A) synthetase 1, 2-5A synthase 1, 2-5A synthetase 1, IFI-4, OAS1, OIAS, OIASI, p46/p42 OAS |
| 背景 |
|---|
| OAS1 是一种 I 型干扰素诱导的 2′–5′ 寡腺苷酸合成酶，属于 OAS 家族的双链 RNA 感应酶，通过将病毒 RNA 识别与 RNA 降解调控和翻译终止联系起来，在先天性抗病毒防御中发挥核心效应作用。其催化核心具有 OAS 蛋白特有的核苷酸转移酶折叠结构，并包含保守的酸性残基，这些残基可与二价阳离子配位以进行 ATP 聚合。而通过选择性剪接产生的 C 端区域则形成多种人类亚型，这些亚型具有不同的尾部序列，从而影响其亚细胞分布、酶活性以及与细胞膜或伴侣蛋白的相互作用。双链RNA结合诱导变构重排，使活性位点残基排列，从而利用ATP合成2′–5′连接的寡腺苷酸。这些2′–5′寡聚体作为第二信使，结合潜在的单体RNase L，促进其二聚化，并触发病毒和细胞RNA的核酸内切酶切割，最终导致蛋白质合成的广泛抑制和病毒复制的限制。OAS1活性整合到干扰素刺激基因网络中，其诱导表达和dsRNA依赖性激活与RIG-I样受体、PKR和cGAS-STING通路平行运作，虽然配体识别和催化机制不同，但最终都汇聚于翻译调控、RNA周转和抗病毒信号的放大。人类OAS1的亚型库包含具有不同C端延伸和异戊二烯化基序的变体，这些变体将部分亚型定位于细胞内膜和复制细胞器，并决定了哪些双链RNA底物被识别、2′–5′寡聚体的产生效率以及RNase L依赖性抗病毒程序的激活强度。2′–5′寡腺苷酸输出和双链RNA反应性的亚型特异性差异赋予OAS1调节翻译阻滞和RNA降解的程度和持续时间的能力，以应对特定的病毒感染环境，同时在未感染状态下维持基础RNA代谢。 OAS1 基因座的遗传变异会改变剪接位点的使用和蛋白质序列，从而改变异构体丰度、酶特性和抗病毒能力，这些变化与人类对病毒感染的易感性或抵抗力以及自身免疫或炎症表型有关，在这些表型中，干扰素信号传导和 RNA 感应长期处于激活状态。 |
| 参考文献 |
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