Perilipin-2 Antibody (Rabbit mAb) [K24J8]
目录号: F5935
抗体应用：
反应性：
-
Lane 1: Mouse brain, Lane 2: Rat brain
使用信息
| 稀释比例 |
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| 抗体应用 |
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| WB |
| 反应性 |
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| Mouse, Rat, Human |
| 抗体类型 |
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| Rabbit Monoclonal Antibody |
| 储存液配方 |
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| PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 |
| 储存条件(自收到货起) |
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| -20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years |
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预测分子量
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48 kDa
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| 阳性对照 | Human fetal liver; Rat brain; Mouse brain; Human milk; HepG2 cells; JAR cells |
|---|---|
| 阴性对照 |
实验方法
| WB |
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实验步骤： 样品制备
1. 组织样品：破碎组织，加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），低温匀浆或置于冰上超声裂解样品，静置30 min。 2. 贴壁细胞样品：吸去培养基, 用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 3. 悬浮细胞样品：将培养基转移至离心管中离心，弃上清，用冰冷的 PBS 清洗细胞 2 遍。加入适量冰冷的 RIPA/NP-40 Lysis Buffer （含蛋白酶抑制剂Cocktail），超声处理以裂解细胞，并在冰上孵育 30 分钟。 4. 将所得匀浆液/裂解液置于离心机中 4°C 离心 15 min，收集上清液；
5. 取少量裂解液测定蛋白质浓度；
6. 加入蛋白上样缓冲液，将 20 µL样品在 95~100°C加热 5 min，冰上静置冷却后离心 5 min。
电泳分离
1. 根据所提蛋白的浓度，将适量蛋白样品和 Marker 上样至 SDS-PAGE 凝胶。建议分离胶（即下层胶）浓度：10 %。 SDS-PAGE 分离胶浓度选择参照表 2. 电源调 80 V, 30 min。然后电源调 110 V~150 V，观察 Marker，待蛋白所在的预染蛋白 Marker 指示带得到合适的分离后，即可停止电泳。（注意电泳时电流切勿过大，如超过 150 mA 会导致温度上升，容易影响跑胶结果。如无法避免采用大电流，可对电泳槽使用冰浴降温。）
转膜
1.拿出电转槽，把夹子和耗材浸泡在预冷电转液中；
2.用甲醇活化 PVDF 膜 1 min，用转移缓冲液冲洗；
3.按照“夹子黑边-海绵-滤纸-滤纸-胶-PVDF膜-滤纸-滤纸-海绵-夹子白边”的顺序安装好； 4.将蛋白电转移至 PVDF膜上。（推荐采用 0.45 µm PVDF 膜） PVDF 膜孔径规格选择参照表 湿转法参考条件：200 mA, 120 min。
（注意电转条件可根据蛋白大小适当调节，分子量大的蛋白适宜采用大电流，并延长转膜时间，但需要确保电转槽始终处于低温的环境中，避免凝胶融化。）
封闭
1. 电转移后，室温下用 TBST 洗膜 5 min；
2. 在封闭液中将膜孵育 1 h，室温；
3. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
抗体孵育 1. 用 一抗稀释液配制一抗工作液（建议一抗稀释比 1:1000），4°C 条件下与膜轻柔摇晃孵育过夜； 2. 用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min；
3. 在封闭液中加入二抗，室温条件下与膜轻柔摇晃孵育 1 h；
4. 孵育结束后，用 TBST 洗膜 3 次，每次 5 min。
显色
1. 加入配制好的 ECL 发光底物（或根据二抗选择其他显色基质）混合均匀；
2. 与膜孵育1 min，去除多余底物（需保持膜湿润），置于显影仪中进行曝光。
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生物描述
| 特异性 |
|---|
| Perilipin-2 Antibody (Rabbit mAb) [K24J8] 可检测内源性 Perilipin-2 总蛋白水平。 |
| 蛋白定位 |
|---|
| 脂滴，内膜系统 |
| Uniprot ID |
|---|
| Q99541 |
| 克隆号 |
|---|
| K24J8 |
| 别名 |
|---|
| ADFP, PLIN2, Perilipin-2, Adipophilin, Adipose differentiation-related protein, ADRP |
| 背景 |
|---|
| 脂肪滴结合蛋白-2（Perilipin-2），又称脂肪分化相关蛋白（ADFP 或脂肪滴蛋白），是脂肪滴结合蛋白家族（perilipin/PAT 家族）的成员，广泛表达于各种组织中，尤其在肝脏、脂肪组织、骨骼肌和胰岛等中性脂质代谢活跃的组织中高表达。在这些组织中，脂肪滴结合蛋白-2作为脂滴的结构成分，参与脂滴的形成和维持。该蛋白包含一个高度保守的 N 端 PAT 结构域（在脂肪滴结合蛋白家族中高度保守，可稳定新生脂滴）、一个由 11 聚体重复序列组成的中部区域（介导胞质脂滴结合）以及一个支持膜结合的 C 端四螺旋束。这种模块化结构使得脂肪滴结合蛋白-2 能够与磷脂共同包被脂滴表面，并界定脂肪酶和转运因子进入储存的甘油三酯和胆固醇酯的界面。从机制上讲，perilipin-2 通过促进中性脂质隔离到胞质甘油三酯中，抑制其掺入极低密度脂蛋白，并减缓甘油三酯的周转，从而促进脂肪酸的吸收和储存；小鼠中 Adfp 的基因缺失可使肝脏甘油三酯含量降低 60%，增加肝脏 VLDL 分泌，缓解肝脂肪变性，并改善瘦素缺乏动物的全身胰岛素抵抗，这表明 perilipin-2 起到守门人的作用，在营养过剩的情况下，有利于细胞内脂质的保留并限制其输出。在胰岛中，perilipin-2 通过控制胰岛甘油三酯的储存并影响胰岛素分泌来调节脂质代谢：perilipin-2 表达增加会增强脂质积累并改变营养信号和脂毒性应激之间的平衡，而敲低实验表明，perilipin-2 表达降低会减少甘油三酯的储存并改变脂肪酸刺激的胰岛素释放，从而将脂滴支架与 β 细胞的功能反应直接联系起来。在脂肪分解机制层面，perilipin-2 与脂肪甘油三酯脂肪酶 (ATGL) 竞争并减少其与脂滴的结合，从而减缓甘油三酯的周转并稳定储存的脂肪；与被其他 perilipin 家族成员包裹的脂滴相比，主要被 perilipin-2 包裹的脂滴对脂质的保护作用更强，并且更容易进行基础脂肪分解，这导致了脂肪酶可及性和能量动员的组织特异性差异。过氧化物酶体增殖物激活受体α激动剂和禁食可诱导肝脏中perilipin-2的表达。该蛋白确保足够的脂滴形成，以缓冲进入肝脏的脂肪酸并防止不受控制的脂毒性。然而，肥胖和代谢综合征中perilipin-2的慢性上调与肝脏脂质过度储存、非酒精性脂肪肝和全身性胰岛素抵抗相关。perilipin-2 C端区域的人类遗传变异，例如251位丝氨酸被脯氨酸取代，会破坏预测的α螺旋结构，从而降低血浆甘油三酯水平并改变脂肪分解，这进一步强调了螺旋束在控制脂滴动态和甘油三酯周转中的重要性。据报道，结直肠癌、肾癌和肺腺癌中也存在 perilipin-2 表达升高的情况，这与脂滴丰度增加相关，并且可以通过 Akt 磷酸化促进细胞增殖，这支持了它作为富含脂质肿瘤的生物标志物的应用，并突显了脂质储存机制和致癌信号之间的交集。 |
| 参考文献 |
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