Phospho-PLCG 2 (Tyr759) Antibody (Rabbit mAb) [N11A6]

目录号: F8632

抗体应用：反应性：Human

规格	价格	库存
20uL	790	现货
50uL	1240	现货
100uL	1990	现货
100uL*2	3790	现货
400-668-6834 info@selleck.cn

使用信息

稀释比例
WB1:500-1:1000 IF1:50 - 1:100

抗体应用
WB, IF

反应性
Human

抗体类型
Rabbit Monoclonal Antibody

储存液配方
PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

储存条件(自收到货起)
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

预测分子量实际分子量
148 kDa 150 kDa
^*为什么预测分子量和实际分子量会有不同？以下原因可能会导致蛋白分子量与预测不同：翻译后修饰（磷酸化/糖基化）；剪接变体和异构体；相对电荷；多聚体。

Datasheet & SDS

生物描述

特异性
Phospho-PLCG 2 (Tyr759) Antibody (Rabbit mAb) [N11A6] 仅识别 Tyr759 处磷酸化的内源性 PLCG 2 蛋白水平。

克隆号
N11A6

别名
Phosphoinositide phospholipase C-gamma-2, Phospholipase C-IV, Phospholipase C-gamma-2, PLC-IV, PLC-gamma-2, PLCG2

背景
PLCγ2属于磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cγ家族，作为B细胞受体激活后下游的关键脂肪酶效应分子，水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸酯（PI2P）生成第二信使肌醇三磷酸酯（IP3）和二酰甘油（DAG）。抗原与B细胞受体结合后，会触发由激酶Lyn、Syk和Btk以及衔接蛋白BLNK组成的多蛋白信号复合物的组装。该复合物指导PLCγ2在三个特定位点Tyr753、Tyr759和Tyr1217的顺序酪氨酸磷酸化。在受体最大程度刺激后，Tyr1217的磷酸化程度约为Tyr753或Tyr759的三倍。 Src家族激酶抑制和Syk缺失均可消除PLCγ2在所有三个位点的磷酸化。对两种候选PLCγ2激酶的直接生化比较表明，纯化的Btk在体外磷酸化重组PLCγ2的效率显著高于Syk。Syk的主要作用是磷酸化BLNK，BLNK随后提供PLCγ2募集到信号体中的对接位点，而非直接磷酸化PLCγ2。在PLCγ2缺陷型DT40 B细胞中进行的功能重建表明，Tyr753和Tyr759是PLCγ2恢复B细胞受体结合下游钙信号所必需的。这两个残基的联合突变（Y753F/Y759F）完全消除了刺激细胞中可检测到的PLCγ2酪氨酸磷酸化，从而证实这两个位点对于有效的信号传导至关重要，而非偶然的磷酸化事件。与此一致，在初步测量中，Tyr753 和 Tyr759 的磷酸化程度与 PLCγ2 脂肪酶活性直接相关，而 Tyr1217 的磷酸化则未显示出这种相关性，这表明 Tyr759 是一个功能性激活磷酸化位点，而不仅仅是受体结合的标志物。使用组成型膜锚定 PLCγ2 构建体进行的膜筏靶向实验证实，Tyr753 和 Tyr759 是刺激后底物水解所必需的，即使绕过正常的 BLNK 依赖性募集步骤，这种必需性仍然存在。而 PLCγ2 自身的 SH2 结构域对这一瞬时激活步骤的贡献相对较小，反而似乎在持续信号传导期间稳定激活的酶。 T 细胞和血小板中的免疫受体结合同样会诱导 Tyr753 和 Tyr759 的磷酸化，但不会诱导 Tyr1217 的磷酸化，这表明这种激活磷酸化机制在多种免疫细胞谱系中发挥作用，而不仅仅局限于 B 细胞，并且 Tyr759 依赖性 PLCγ2 激活的破坏与免疫失调表型以及与慢性淋巴细胞白血病中 Btk 靶向治疗耐药性相关的 PLCG2 突变有关。

背景

PLCγ2属于磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cγ家族，作为B细胞受体激活后下游的关键脂肪酶效应分子，水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸酯（PI2P）生成第二信使肌醇三磷酸酯（IP3）和二酰甘油（DAG）。抗原与B细胞受体结合后，会触发由激酶Lyn、Syk和Btk以及衔接蛋白BLNK组成的多蛋白信号复合物的组装。该复合物指导PLCγ2在三个特定位点Tyr753、Tyr759和Tyr1217的顺序酪氨酸磷酸化。在受体最大程度刺激后，Tyr1217的磷酸化程度约为Tyr753或Tyr759的三倍。 Src家族激酶抑制和Syk缺失均可消除PLCγ2在所有三个位点的磷酸化。对两种候选PLCγ2激酶的直接生化比较表明，纯化的Btk在体外磷酸化重组PLCγ2的效率显著高于Syk。Syk的主要作用是磷酸化BLNK，BLNK随后提供PLCγ2募集到信号体中的对接位点，而非直接磷酸化PLCγ2。在PLCγ2缺陷型DT40 B细胞中进行的功能重建表明，Tyr753和Tyr759是PLCγ2恢复B细胞受体结合下游钙信号所必需的。这两个残基的联合突变（Y753F/Y759F）完全消除了刺激细胞中可检测到的PLCγ2酪氨酸磷酸化，从而证实这两个位点对于有效的信号传导至关重要，而非偶然的磷酸化事件。与此一致，在初步测量中，Tyr753 和 Tyr759 的磷酸化程度与 PLCγ2 脂肪酶活性直接相关，而 Tyr1217 的磷酸化则未显示出这种相关性，这表明 Tyr759 是一个功能性激活磷酸化位点，而不仅仅是受体结合的标志物。使用组成型膜锚定 PLCγ2 构建体进行的膜筏靶向实验证实，Tyr753 和 Tyr759 是刺激后底物水解所必需的，即使绕过正常的 BLNK 依赖性募集步骤，这种必需性仍然存在。而 PLCγ2 自身的 SH2 结构域对这一瞬时激活步骤的贡献相对较小，反而似乎在持续信号传导期间稳定激活的酶。 T 细胞和血小板中的免疫受体结合同样会诱导 Tyr753 和 Tyr759 的磷酸化，但不会诱导 Tyr1217 的磷酸化，这表明这种激活磷酸化机制在多种免疫细胞谱系中发挥作用，而不仅仅局限于 B 细胞，并且 Tyr759 依赖性 PLCγ2 激活的破坏与免疫失调表型以及与慢性淋巴细胞白血病中 Btk 靶向治疗耐药性相关的 PLCG2 突变有关。

参考文献
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11606584/ https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15509800/

PVDF膜孔径规格选择参照表

Protein Size (kDa)	PVDF Transfer Membrane Pore Size (μm)
< 10	0.22
10-20	0.22
20-30	0.45
30-45	0.45
45-70	0.45
80-100	0.45
100-140	0.45
> 140	0.45

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* 必填项

Protein Size (kDa)	Separating Gel Percentage
4-40	20%
12-45	15%
10-70	12.5%
15-100	10%
25-100	8%
60-210	5%